bifc实验动物,bic笔动物实验
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1、双分子荧光互补实验的简介
双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)分析技术,是由Hu等在2002年最先报道的一种直观、快速地判断目标蛋白在活细胞中的定位和相互作用的新技术。
这两个荧光目标产物可能是染料或者染料添加剂。染料可以在特定的可见光下发出光谱,而染料添加剂可以增加染料的荧光强度,以及改变染料的光谱特性。
基本原理 在验证植物蛋白互作时,荧光素酶互补实验 (Luciferase Complementation Assay, LCA) 因其高灵敏度、可定量化、操作简单高效被广泛应用于植物学和动物学蛋白质互作研究[2]。
其他蛋白质片段互补技术主要通过检测底物的变化来间接的反映蛋白质间的相互作用,不能确定蛋白质相互作用的位置。由于重建后的荧光蛋白结构较稳定,双分子荧光互补技术还可以用于研究蛋白质之间的弱相互作用或瞬间相互作用。
当2个融合蛋白在细菌内表达时能够特异的定位到eIF4A的适配子上,2个荧光片段彼此靠近互补,可以被激发产生荧光,从而照亮连接有eIF4A适配子的RNA。Ozawa等用基于GFP的BiFC系统标记并研究了真核细胞线粒体RNA。
2、bifc实验原理
将蛋白在某些特定的位点切开,形成不发荧光的N和C端2个多肽,称为N片段(N-fragment)和C片段(C-fragment)。
免疫共沉淀,coimmuno-precipitation(co-IP),这个技术呢,其原理是利用抗原抗体的亲和性来验证蛋白质之间的相互作用。
3、双分子荧光互补的BiFC技术的应用
由于重建后的荧光蛋白结构较稳定,双分子荧光互补技术还可以用于研究蛋白质之间的弱相互作用或瞬间相互作用。BiFC技术的最大缺陷是多个BiFC系统对温度敏感。温度高时,片段间不易互补形成完整的荧光蛋白。
本项目以日本晴水稻为材料,利用酵母双杂交,以及水稻原生质体双分子荧光互补技术(BiFC)双层次方法探讨水稻TPR蛋白OsTPR1与乙烯受体相互作用情况,并且进一步对它们互作的关键区域进行了研究。
年,Shyu等又将BiFC技术和FRET技术结合起来,建立了基于双分子荧光互补的荧光共振能量转移技术(BiFC-FRET),BiFC2FRET采用了青色的荧光蛋白cerulean和1个黄色的基于venus的BiFC系统联用,能同时检测3个蛋白之间的相互作用。
双分子荧光互补技术是指将荧光蛋白多肽链在一些非保守氨基酸上切割,形成两个非荧光的N端和C端多肽片段。这两个荧光蛋白片段分别连接到一对可以相互作用的靶蛋白上。
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