乙撑硫脲动物实验(乙撑硫脲在光亮剂中的应用)
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1、edman降解法反应机理?
N末端氨基酸残基被异硫氰酸苯酯修饰,然后从多肽链上切下修饰的残基,再经层析鉴定,余下的多肽链(少了一个残基)被回收再进行下一轮降解循环。
用异硫氰酸苯酯(PITC)与待分析多肽的N-端氨基在碱性条件下反应,生成苯氨基硫代甲酰胺(PTC)的衍生物,然后用酸处理,关环,肽链N-端被选择性地切断,得到N-端氨基酸残基的噻唑啉酮苯胺衍生物。接着用有机溶剂将该衍生物萃取出来,酸作用下,该衍生物不稳定,会继续反应,形成一个稳定的苯基乙内酰硫脲(PTH)衍生物。余下肽链中的酰胺键不受影响。通过用HPLC或电泳法分析生成的苯乙内酰硫脲(PTH-氨基酸),可以鉴定出是哪一个氨基酸。每反应一次,结果是得到一个去掉N-端氨基酸残基的多肽,剩下的肽链可以进入下一个循环,继续发生降解。
Edman降解(Edman degradation),是测定蛋白质一级结构的方法,主要是从蛋白质或多肽氨基末端进行分析。分为耦合、切割、萃取、转化、鉴定等几个步骤。
首先在pH9.0的碱性环境下,将异硫氰酸苯酯(Ph—N=C=S,PITC)和蛋白质或多肽N端氨基酸耦合,形成苯氨基硫甲酰(PTC)衍生物。
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