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1. sirna干扰原理
2. 化学合成的SiRNA能直接注射到动物吗
3. RFect 小核酸转染试剂步骤
4. siRNA实验方法和设计常见问题解答

1、sirna干扰原理

sirna干扰原理是：病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因随机整合到宿主细胞基因组内，并利用宿主细胞进行转录时，常产生一些dsRNA。

sirna干扰原理如下：小干扰RNA（Small interfering RNA；siRNA）有时称为短干扰RNA（short interfering RNA）或沉默RNAsilencing RNA，是一个长20到25个核苷酸的双股RNA，在生物学上有许多不同的用途。

其作用机制是双链RNA被特异的核酸酶降解，产生干扰小RNA（siRNA），这些siRNA与同源的靶RNA互补结合，特异性酶降解靶RNA，从而抑制、下调基因表达。

interference；RNAi定义1：与靶基因同源的双链RNA诱导的特异转录后基因沉默现象。其作用机制是双链RNA被特异的核酸酶降解，产生干扰小RNA（siRNA），这些siRNA与同源的靶RNA互补结合，特异性酶降解靶RNA，从而抑制、下调基因表达。

2、化学合成的SiRNA能直接注射到动物吗

有。这种酶发生在RNAi过程中，被称为RdRP（RNA-dependent RNA Polymerase）。比如，秀丽隐杆线虫（C. elegans）的RNAi中的EGO1因子即为这种酶。

SiRNA：通常是外源的，如病毒感染和人工插入的dsRNA被剪切后产生外源基因进入细胞（注：病毒入侵，或者是自身合成RNA中出现错误，细胞内就会产生双链RNA，来阻止这些异常基因的表达）。

RFect使用极其简便，先将siRNA与RFect室温混合，再将siRNA-RFect 混合物直接加入含培养基的细胞，血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。

这些基因的突变体产生的动物通过注射dsRNA可以抵抗沉默，但是沉默可以通过从没有沉默缺陷的杂合子亲本中传递siRNA来实现。

3、RFect 小核酸转染试剂步骤

本产品适用于细胞株转染，原代细胞转染，请选择RFectPM小核酸转染试剂。操作步骤： 本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。

有关RFectSP悬浮细胞小核酸转染试剂的材料合成和试剂配制我们已申请了国际专利，并通过PCT覆盖国际上多个国家和地区。

4、siRNA实验方法和设计常见问题解答

A5：检测时间问题不大。阳性对照为阴性，说明实验过程或者阳性对照本身就有问题。

E.选择合适的转染试剂：针对siRNA制备方法以及靶细胞类型的不同，选择好的转染试剂和优化的操作对siRNA实验的成功至关重要。F.通过合适的阳性对照优化转染和检测条件：对大多数细胞，看家基因是较好的阳性对照。

合成的siRNA注意纯度和工作浓度 siRNA的合成需要注意的是一定要选用高纯度的siRNA，siRNA的纯度直接关系到转染效率和沉默效率。siRNA的工作浓度和siRNA的设计、细胞种类、目标基因有关。建议一定进行相关的预实验优化各条件。

设置空白对照组，检验细胞生长状态。设置阴性对照组，无血清培养基 Entranster-E 电转染试剂 阴性siRNA。

敲低实验（RNAi）是一种研究基因功能的重要方法，通过使用小干扰RNA（siRNA）来降低目标基因的表达水平，进而探究其功能及其在细胞或生物体内的作用机制。

到此，以上就是小编对于动物实验用sirna方法的问题就介绍到这了，希望介绍关于动物实验用sirna方法的4点解答对大家有用。