大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于免疫荧光实验原理及其步骤动物的问题，于是小编就整理了1个相关介绍免疫荧光实验原理及其步骤动物的解答，让我们一起看看吧。

1. 核定位的蛋白做免疫荧光需要dapi染色么

1、核定位的蛋白做免疫荧光需要dapi染色么

细胞Ki67染色，应该是核定位蛋白，却总是染色到胞质，尝试过很多方法，包括抗体稀释液全部用0.3%TritonX-100，未做封闭，延长4度条件下一抗孵育时间至48h，改用37度水浴孵育一抗...还是没有明显的改善，不知道怎么该处理。

复染细胞核，常规用过的是DAPI进行细胞核复染（蓝色）。目的是为了鉴别目的蛋白的位置是胞核表达，还是胞质表达或胞膜表达。一般来讲，如果是胞核表达，会和蓝色的细胞核颜色重叠；胞质或胞膜表达则不会重合，单独看目的蛋白的表达，会看到有个黑色的空洞的，尤其细胞图像更为明显。

DAPI 为一种荧光染料，可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用，可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞，荧光显微镜荧光显微镜）观察细胞标记的效率高（几乎为100 %） 。

免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来显示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗结合，其次是带有荧光基团的二抗识别并结合一抗，荧光显微镜下即可观察到荧光。实验步骤如下：已转染72h的细胞种于共聚焦专用培养皿里，冰PBS洗三遍，每次5分钟。

到此，以上就是小编对于免疫荧光实验原理及其步骤动物的问题就介绍到这了，希望介绍关于免疫荧光实验原理及其步骤动物的1点解答对大家有用。