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1. 已有质粒怎么慢病毒包装构建稳定细胞株

1、已有质粒怎么慢病毒包装构建稳定细胞株

稳转细胞株构建步骤： 严格细胞检测，确保细胞健康无污染。 精心设计慢病毒包装，包括穿梭质粒、包装质粒和包膜质粒，转染293T细胞，浓缩并筛选病毒。 病毒转导细胞，通过荧光标记筛选，并在一定时间后进行抗性筛选。

构建方法：先把质粒整合到染色体上后，用相应的质粒DNA中的抗性标志来筛选该细胞系，就行成了稳定表达的细胞株。细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。

慢病毒包装简要流程：1）含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3）培养48hrs-72hrs左右，收集含有病毒的上清培养液。4）病毒的纯化和浓缩。5）分装、-80℃保存。6）滴度测定目的基因鉴定。

慢病毒包装简要程序（以六孔板中的1孔为例）：第一天：用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞，2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天：转染293FT细胞。

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