逆转录病毒包装细胞有哪些,逆转录病毒包括
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1、病毒包装的慢病毒
目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个,即gag、pol、rev。
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。
慢病毒载体( Lentiviral vector )较逆转录病毒载体有更广的宿主范围,慢病毒能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。
慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。
慢病毒载体不表达任何HIV-1蛋白,免疫原性低,在注射部位无细胞免疫反应,体液免疫反应也较低,不影响病毒载体的第2次注射。
2、腺病毒是否能在293细胞中复制?
细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系,293T细胞由293细胞派生,同时表达SV40大T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。用Ca3(PO4)2转染效率可高达50%。
pBHG11因为缺失包装信号及E1区而不能复制,pCA13带有包装信号及E1的侧翼序列,但是缺失E1区及腺病毒绝大部分基因组,同样不能复制。外源目的基因插入pCA13后,与pBHG11共转染,进入293细胞。
科学家得到一个稳定的可以快速生长的293单克隆细胞株,自此HEK293 or 293细胞(ATCC CRL-1573)诞生。
腺病毒扩增,也只能在293A里扩增,其他的细胞不行.慢病毒载体多是由HIV改造的,野生型的慢病毒载体是可以复制的,但是用于实验室就只能通过改造使其变为复制缺陷型的。
细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞,表现出典型的腺病毒转化细胞的表型,细胞允许Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。哺乳细胞的大规模培养方式有三种:贴壁培养、微载体培养、无血清悬浮培养。
3、包装反转录病毒(如慢病毒)时采用多质粒系统共转染细胞,那么包转好的...
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。
慢病毒包装系统一般由慢病毒表达载体和慢病毒包装载体组成。而慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。
慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。
无需任何转染试剂,操作简便。5) 可以根据客户需要制备多种标记。慢病毒包装简要流程:1) 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。2) 慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。
细胞培养:B16F10和CD8 T细胞 慢病毒Cas9-Blast与pCMV-dR91和pCMV-VSV-G质粒共转染到HEK293T细胞中,然后收割病毒滴定后储存。
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