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1. 腺病毒包装技术的简介

1、腺病毒包装技术的简介

病毒滴度高，可用于动物水平的实验。 有较好的生物安全性。腺病毒携带的基因不会整合到宿主细胞基因组中；实验中虽然会有一定机率出现RCA（即复制型腺病毒），但由于大多数成人体内都有针对腺病毒的抗体，所以一般危害不大。

重组腺病毒的包装制备：重组腺病毒是从由侵染色斑组成单位（pfu）中分离获得的。一个单色斑是线性载体质粒转染后在20×15 cm板上由293A细胞连续侵染后被挑选和扩增形成的。重组腺病毒可通过超速离心纯化，并测定滴度及进行PCR鉴定。纯化后重组腺病毒的滴定浓度为1010pfu/ml，获得的量为2-4 ml。

能自行复制，有效进行增殖，产生滴度高；与人类基因同源；能在同一细胞株或组织中设计表达多个基因。最简单的方法是将含有两个基因的双表达盒插入腺病毒转移载体中，或者用不同的重组病毒共转染目的细胞株来分别表达一个蛋白。

腺病毒是无包膜的线性双链DNA病毒，在自然界分布广泛，至少存在100种以上的血清型。其基因组长约36kb，两端各有一个反向末端重复区（ITR），ITR内侧为病毒包装信号。基因组上分布着4个早期转录元（EEEE4）承担调节功能，以及一个晚期转录元负责结构蛋白的编码。

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