1.  > 病毒包装

质粒为什么需要病毒包装(为什么质粒需要人工改造)

质粒为什么需要病毒包装(为什么质粒需要人工改造)

大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于质粒为什么需要病毒包装的问题,于是小编就整理了4个相关介绍质粒为什么需要病毒包装的解答,让我们一起看看吧。

  1. 病毒为什么要包装后才能转染细胞
  2. 带puro的质粒载体必须进行病毒包装吗
  3. 慢病毒包装的原理
  4. 在动物转基因中,为什么常用病毒载体

1、病毒为什么要包装后才能转染细胞

病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。

病毒载体构建完成后,可以不进行包装,直接转染细胞,也可以到达构建稳转株或者基因敲除的效果,但是效率非常低,因为有些细胞非常难转染。所以要先转染好转染的细胞,包装成病毒,然后再感染相应的靶细胞,就可以达到较好的效果。

克隆经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达。

包膜上的刺突蛋白是识别宿主细胞的重要工具,所以失去了包膜的HIV病毒不再具有侵染力,因此HIV对表面活性剂敏感。

2、带puro的质粒载体必须进行病毒包装吗

携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下,经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒,通过感染细胞或活体组织,实现外源基因在细胞或活体组织中表达。 慢病毒载体系统由两部分组成,即包装成分和载体成分。

病毒包装,是一种基因诊断、基因治疗技术。主要是将外源基因DNA或RNA片段导入靶细胞或组织,研究靶基因的上调或抑制情况。

根据不同的目的,可以选择不同的载体,如过表达(pcDNA 0)、敲减(pLKO.1-TRC)、原核纯化(pGEX-4TpET-28a)、病毒包装(pMSCV-puro)、敲除(lentiCRISPR v2)等。下面我们就以过表达载体pcDNA 0为例进行讲解。

就是为了不使其进行重组。所以包装蛋白的RNA是不进入包装完成的病毒的。包装出来的病毒也不具备增殖能力。只有结构质粒含有5;LTR和3;LTR,可以重组入宿主细胞基因组,但重组效率不到包装完成后病毒的重组效率的十分之一。

3、慢病毒包装的原理

病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。

慢病毒载体(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统,它能高效的将目的基因(蛋白质编码序列、shRNA或gRNA)导入动物和人的原代细胞或细胞系。

原理 慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。

慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。

4、在动物转基因中,为什么常用病毒载体

原因有两点 动物病毒具有主动攻击性可将目的基因转移到宿主细胞中去;是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。最终在宿主细胞中表达大量目的基因产物,经分离纯化被人们利用。

为什么动植物病毒也可以做基因工程的载体 质粒和噬菌体载体只能在细菌中繁殖,不能满足真核DNA重组需要。感染动物的病毒可改造用作动物细胞的载体。

反转录病毒不但感染效率高,而且通常还不会导致寄主细胞的死亡,被它感染的或转化的动物细胞能够持续许多世代,保持正常生长和保持病毒感染性的能力。

因为病毒可以比较容易的进入细胞,而其因其自身容易在细胞复制、表达的特性,可也提高目的基因整合进受体和在受体中表达的概率。一般选用病毒作为载体前会将病毒的治病基因除去,所以不会对细胞造成伤害。

质粒和噬菌体载体只能在细菌中繁殖,不能满足真核DNA重组需要。感染动物的病毒可改造用作动物细胞的载体。由于动物细胞的培养和操作较复杂、花费也较多,因而病毒载体构建时一般都把细菌质粒复制起始序列放置其中。

到此,以上就是小编对于质粒为什么需要病毒包装的问题就介绍到这了,希望介绍关于质粒为什么需要病毒包装的4点解答对大家有用。

[免责声明]本文来源于网络,不代表本站立场,如转载内容涉及版权等问题,请联系邮箱:3801085100#qq.com,#换成@即可,我们会予以删除相关文章,保证您的权利。 转载请注明出处:http://www.mxzdyx.cnhttp://www.mxzdyx.cn/hdss1/1049.html