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慢病毒包装工具细胞-慢病毒包装失败的原因

慢病毒包装工具细胞-慢病毒包装失败的原因

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  1. 怎么用慢病毒感染目的细胞?慢病毒感染细胞的具体操作是什么?

1、怎么用慢病毒感染目的细胞?慢病毒感染细胞的具体操作是什么?

含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。2) 慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3) 培养 48hrs – 72hrs 左右,收集含有病毒的上清培养液。4) 病毒的纯化和浓缩。5) 分装、- 80 ℃保存。6) 滴度测定目的基因检定,并出具检测报告。

慢病毒细胞转染是指利用慢病毒作为载体,将某种外源基因和重组质粒等DNA分子导入到目标细胞中的一种技术手段。慢病毒可以带有细胞进入人体细胞内,随后融入宿主细胞的DNA中。此种技术应用广泛,可以用于基因治疗、基因表达等研究中。

慢病毒转染涉及三个关键步骤:构建载体、病毒的生产和提纯,以及靶细胞的感染。首先,载体构建是基础,慢病毒载体通常基于HIV-1的基因组,区别于普通逆转录病毒,它能感染分裂和非分裂细胞。构建时,包含病毒包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列,以及异源启动子和多克隆位点,便于目的基因插入。

细胞培养:B16F10和CD8 T细胞 慢病毒Cas9-Blast与pCMV-dR91和pCMV-VSV-G质粒共转染到HEK293T细胞中,然后收割病毒滴定后储存。该步的目的是对慢病毒Cas9-Blast进行包装,得到能够将目的序列稳定插入到宿主细胞中的病毒颗粒该病毒颗粒用于感染宿主细胞B16F10。

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