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病毒包装促转染试剂,病毒助转剂

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  1. 293T细胞是怎么包装病毒的
  2. 转染试剂哪种好
  3. 293T细胞转染病毒包装及肿瘤细胞转染中好用的转染试剂?

1、293T细胞是怎么包装病毒的

慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例):第一天:用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天:转染293FT细胞。

T细胞是由293 细胞派生, 表达SV40 大T抗原的人肾上皮细胞系, 被广泛应用于瞬时转染以过表达各种目标蛋白, 或是用以包装病毒。 293T 为贴壁细胞, 这种细胞对培养基的营养成分要求并不高。

将细胞培养瓶竖立放置,吸走培养基,如果培养基中的脱落细胞较多,说明细胞现在很容易脱落,只要加入1ml的PBS EDTA(0.02%),来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落,加入10mlMEM,混匀,不能吹打,分装2瓶。

腺病毒可以在293A细胞中进行转录,表达并可进行包装复制出大量高滴度病毒。293T是一种逆转录包装表达细胞,我做过也可进行表达,但还没有具体鉴定表达后的病毒是否可用。

2、转染试剂哪种好

质粒DNA转染试剂: RFect 系列 质粒DNA转染试剂 RFect系列质粒DNA转染试剂专门用于质粒DNA的转染,具有非常卓越的转染性能,可高效转染绝大多数贴壁细胞、原代细胞和悬浮细胞。

Lipofectamine、fugene、磷酸钙、是较为常见的转染试剂,其实目前市场上的转染试剂盒针对某些转染进行了优化,使用起来较为方便。

对于诸如MDCK,MDA-MB231,Caco-2,SaoS-2及HUVEC等难转细胞,可以选用高级转染步骤。

RFectSP Plasmid 具有非常卓越的转染性能,可高效转染多种悬浮细胞,转染效率高达70%以上(EGFP质粒)。RFectSP Plasmid 不仅可转染较大分子的质粒DNA,还可转染RNA和小分子DNA。

FuGENE 6,FuGENE HD,Lipofectamine 2000这几个是用得很广泛的,其他的也有很多,根据用途来选。

3、293T细胞转染病毒包装及肿瘤细胞转染中好用的转染试剂?

Lipofectamine 转染试剂可以将 siRNA 快速、转染到多种细胞类型中,并且具有较高的效率。目前也常被用于将 siUch-L1 从 Ambion 传递到HEK-293 细胞,在哺乳动物细胞中导入Accell siRNA 等寡核苷酸也会用到该转染介质。

.CFPEO细胞系转染试剂:CFPEO细胞系研究主要方向是哮喘、病毒感染、纤维化肺病和囊性纤维化等呼吸道问题。而CFPEO细胞系转染试剂一般适用于用于人气管上皮细胞的转染。

慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例):第一天:用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天:转染293FT细胞。

应该把培养瓶或培养皿沿X、Y轴方向水平移动几下, 防止细胞都聚在中间或者四周。冷冻293T 细胞的冻存液可以用95% 小牛血清加5% 二甲基亚砜, 复苏率很高。

HEK-293T细胞是293T(293tsA1609neo)细胞系(ATCC CRL-11268)的衍生物。细胞持续表达SV40抗原,该细胞常用于转染实验,转染效率较高。

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