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1. 一招教会你慢病毒包装(带详细教程、滴度测定)

1、一招教会你慢病毒包装(带详细教程、滴度测定)

要掌握慢病毒包装，首先确保使用无菌且在10代以内的HEK 293T细胞，以保证产品质量。选择合适的转染试剂，如PEI，遵循其特定步骤进行操作。实验过程中，需在DMEM无血清无双抗培养基和完全培养基之间切换，使用10mL无菌注射器和0.45μm细菌滤器。

慢病毒的包装过程分为几个步骤：第一天晚上7点，将400万细胞铺在10cm的培养皿中，如果计数有困难，可以在细胞密度约90%时进行1：5传代，确保每份有相近数量的细胞。第二天下午3点，进行三质粒转染。

慢病毒包装简要流程：1）含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3）培养48hrs-72hrs左右，收集含有病毒的上清培养液。4）病毒的纯化和浓缩。5）分装、-80℃保存。6）滴度测定目的基因鉴定。

准备工作：使用293T细胞，传代至80%密度，推荐购买新细胞株分批冻存，确保不超过10代，使用进口血清，复苏后传2代，细胞密度80%左右进行转染。 转染前准备：在转染前1-2小时更换新鲜培养基，注意避免细胞冲起。

慢病毒包装流程包括：首先，利用HEK293T细胞制备重组病毒，通过转染系统将目的基因替换病毒的原有基因。然后，进行细胞培养，转染后观察转染效率，收集病毒并测定其滴度。滴度测定方法有两种：整合数法和孔稀释法，通过感染细胞、提取基因组DNA并进行qPCR检测，计算病毒的整合单位。

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