慢病毒的包装滴度(慢病毒包装滴度检测)
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1、给大鼠注射腺病毒和慢病毒的区别
慢病毒操作较方便,周期也短。但腺病毒表达快,1-2天,慢病毒要2-4天。
慢病毒:1原理 慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种(单链RNA病毒)。
逆转录病毒载体只能感染分裂期细胞,而且容量有限,腺病毒一般不能整合到染色体上,只能进行瞬时感染。与其它逆转录病毒相比,慢病毒(LV)具有可以感染非分裂期细胞、容纳外源性基因片段大,可以长期表达等显著优点。
真核表达载体包括腺病毒载体和慢病毒载体,在真核细胞内用于表达目的蛋白的载体都可以叫做真核载体。腺病毒载体携带外源基因较大,可瞬时高表达。慢病毒载体携带外源基因较小些,但可以重组入细胞基因组,稳定高表达。
2、慢病毒包装试剂盒包出病毒的滴度一般是多少
包装量:慢病毒可以包装4kb左右,不超过8kb的外源基因,腺病毒可以包装8kb左右外源基因 慢病毒操作较方便,周期也短。但腺病毒表达快,1-2天,慢病毒要2-4天。
每次冻融会降低病毒滴度10%~20%左右;为避免反复冻融建议按照每次的使用量进行分装。
我们在预实验方案中加入不同启动子的病毒进行感染,并且用定量PCR测定感染后细胞内整合病毒,这样即使病毒没有表达也可以观察感染。感染前一天接种,使得第二天细胞汇合度为30-40%。
慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。5)分装、-80℃保存。6)滴度测定目的基因鉴定。
重组腺病毒可通过超速离心纯化,并测定滴度及进行PCR鉴定。纯化后重组腺病毒的滴定浓度为1010pfu/ml,获得的量为2-4 ml。重组腺病毒的特性:一般的,单个腺病毒通常是在30×150mm细胞培养皿中制备的。
3、1,慢病毒转染时需要哪些防护措施
转染效率:慢病毒较高慢病毒可以实现稳定转染,腺病毒是瞬时转染包装量:慢病毒可以包装4kb左右,不超过8kb的外源基因,腺病毒可以包装8kb左右外源基因慢病毒操作较方便,周期也短。
第八:打疫苗,很重要。接种疫苗是预防疾病最经济、最有效、最便捷的手段。防控新冠病毒,接种疫苗和个人防护一个都不能少。凡是符合接种条件的人员要积极接种新冠病毒疫苗,为构建免疫屏障贡献一臂之力。
疫情防控的措施:尽量减少外出活动,外出佩戴口罩。主动做好健康监测,自觉发热时主动测量体温。若出现可疑症状,应主动戴上口罩及时就近就医。办公场所要注意加强通风清洁,配备洗手液、消毒剂等防护用品。
要求所有的居民在疫情期间尽量不要去人群比较密集的场所,或者是不要去密闭场所。
避免聚餐。聚餐人群相互之间都是密切接触者,咳嗽、打喷嚏产生的飞沫,可直接污染到整个聚餐人群,极易造成疾病传播,为了防止新型冠状病毒传播,少去公共场所。
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