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第二代慢病毒包装-第二代慢病毒包装有哪些

第二代慢病毒包装-第二代慢病毒包装有哪些

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  1. 慢病毒包装的原理
  2. 第二代慢病毒和第三代慢病毒的区别
  3. 慢病毒包装的简要流程

1、慢病毒包装的原理

病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。

慢病毒载体(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统,它能高效的将目的基因(蛋白质编码序列、shRNA或gRNA)导入动物和人的原代细胞或细胞系。

原理 慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。

慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。

目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个,即gag、pol、rev。

2、第二代慢病毒和第三代慢病毒的区别

接下来是三代包病毒系统,它比二代更加安全,效率却没有二代高。病毒感染的本质:它的本质是把自己的序列整入宿主的序列。

不同研究者们用不同的靶点和共刺激信号开展的研究所得到的第二代CAR和第三代CAR的比较结果存在一定的差异性。

慢病毒也被广泛地应用于表达RNAi的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差,转移到细胞内的siRNA半衰期短,体外合成siRNA对基因表达的抑制作用通常是短暂的,因而使其应用受到较大的限制。

慢病毒操作较方便,周期也短。但腺病毒表达快,1-2天,慢病毒要2-4天。

假病毒)的多为慢病毒,慢病毒仍有感染性;装甲病毒(假病毒)与慢病毒不同,由MS2噬菌体外壳蛋白包裹外源核酸片段,无感染性,无自主复制能力,生物安全性高,核酸稳定,不易降解。百代生物就可以做假病毒的。

3、慢病毒包装的简要流程

慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例):第一天:用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天:转染293FT细胞。

慢病毒包装简要流程:1) 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。2) 慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3) 培养 48hrs – 72hrs 左右,收集含有病毒的上清培养液。

慢病毒包装简介及其用途 慢病毒( Lentivirus )载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷 I 型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个,即gag、pol、rev。

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