慢病毒包装效价测试(慢病毒包装shrna)
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1、慢病毒包装试剂盒包出病毒的滴度一般是多少
包装量:慢病毒可以包装4kb左右,不超过8kb的外源基因,腺病毒可以包装8kb左右外源基因 慢病毒操作较方便,周期也短。但腺病毒表达快,1-2天,慢病毒要2-4天。
每次冻融会降低病毒滴度10%~20%左右;为避免反复冻融建议按照每次的使用量进行分装。
我们在预实验方案中加入不同启动子的病毒进行感染,并且用定量PCR测定感染后细胞内整合病毒,这样即使病毒没有表达也可以观察感染。感染前一天接种,使得第二天细胞汇合度为30-40%。
慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。5)分装、-80℃保存。6)滴度测定目的基因鉴定。
重组腺病毒可通过超速离心纯化,并测定滴度及进行PCR鉴定。纯化后重组腺病毒的滴定浓度为1010pfu/ml,获得的量为2-4 ml。重组腺病毒的特性:一般的,单个腺病毒通常是在30×150mm细胞培养皿中制备的。
2、什么是慢病毒包装
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。
慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装 RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。
慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。
慢病毒(Lentivirus) 载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。
3、病毒包装的慢病毒
目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个,即gag、pol、rev。
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。
慢病毒载体( Lentiviral vector )较逆转录病毒载体有更广的宿主范围,慢病毒能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。
慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。
4、病毒包装-慢病毒
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。
慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。
目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个,即gag、pol、rev。
慢病毒载体不表达任何HIV-1蛋白,免疫原性低,在注射部位无细胞免疫反应,体液免疫反应也较低,不影响病毒载体的第2次注射。
5、帮我看看是不是得了猪流感有点发烧,喉咙有点疼,头晕,想睡觉。
甲型H1N1流感的症状:甲型H1N1流感患者通常有39摄氏度以上的高烧、剧烈头疼、肌肉疼痛、咳嗽、鼻塞、红眼等病征。 猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)是猪群中一种可引起地方性流行性感冒的正黏液病毒(Orthomyxoviruses)。
根据您的描述,估计患甲型H1N1流感的可能性不大。但由于现在是甲型H1N1猪流感流行时期,您的症状又与甲型H1N1流感症状中的部分早期症状相似,为了安全起见,我建议您马上去做一个甲型H1N1流感病毒检测,以确认是否有这病。
猪流感全称猪流行性感冒,是猪的一种急性、传染性呼吸器官疾病。其特征为突发,咳嗽,呼吸困难,发热及迅速转归。猪流感是猪体内因病毒引起的呼吸系统疾病。
猪流感症状-猪有可能得的是猪流感。症状表现:体温升高到40度以上、精神沉郁、饮食减少、粪便干燥、尿少色浓、常卧地不起、眼结膜潮红、流泪、鼻粘膜充血、有分泌物、咳嗽、打喷嚏等。严重的病猪,四肢瘫软,甚至死亡。
.5℃以上),厌食,反应迟钝,扎堆,倦怠,肌肉和关节疼痛,常卧地不愿起立,衰竭等;发病猪张口呼吸,呼吸急促和腹式呼吸,伴有眼结膜潮红、水样泪流、流鼻涕、体重下降、虚脱。如果出现继发或合并感染,猪只出现死亡。
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