慢病毒包装无血清培养基(慢病毒包装无血清培养基的原因)
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1、无血清培养基国内哪个品牌的好?
国内生产无血清培养基的有兰州健顺、上海奥浦迈,上海埃泽思等。无血清培养基也有具体细分领域,健顺、奥浦迈主要针对疫苗、抗体药生产领域培养基。
就国内的培养基来说的话,我们用过几个品牌的无血清培养基,经过比较,觉得中山康天晟合的还是尤胜一筹,他们的原材料很多采用进口的∞自身也是港澳大湾区生物科技创新企业50强,这应该是很重要的一个原因。
中山康天晟合有专门的CHO系列培养基和HEK293系列培养基,均为国产无血清,无动物源成分,化学成分限定培养基。
中海生物技术(枣庄)有限公司无血清培养基在批间差异性、使用方法等问题上的改进,使其培养基的成分更加明确,制备更简单。
上海倍谙基生物科技有限公司是响应上海建设具有全球影响力科创中心号召、在上海市政府支持下由华东理工大学谭文松教授创立的成果转化平台。
2、慢病毒包装时为什么要用无血清的培养基,有什么原理
血清饥饿可以增加细胞的胞吞胞饮作用。但这不是必须的。
无血清培养基可避免血清批次间的差异影响,提高细胞培养和实验结果的重复性,减少血清对细胞的毒性作用和血清源性污染,减少了血清中蛋白对某些生物测定的干扰,便于对实验结果的分析。
无血清培养基是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的。合成培养基通过顺序加入其所含的成分包括血清,从而维持细胞在体外较长时间生长繁殖的。所以全合成培养基和无血清培养基区别在于有无血清。
⑤避免了血清中某些因素对有些细胞的毒性,⑥减少了血清中蛋白对某些生物测定的干扰,便于对实验结果的分析。
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。
3、无血清培养基的工艺流程
实验步骤:消化细胞,制备无血清细胞悬浮液,计数,加入细胞悬液100ul,接种细胞105/孔。24孔板(下室)加入600ul含10%胎牛血清培养基,将小室置于24孔板中,上室加100ul无血清培养基悬浮的细胞。
当细胞密度达到1×10~3×10细胞/ml时,传代培养细胞。当细胞密度在培养4到7天后达到2×10~4×10细胞/ml时,细胞完全适应了无血清培养基。
或胎牛血清)。血清亦不能高压灭菌,无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体,置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定,一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制,可选用无血清培养基。
4Matrigel 侵袭实验(Matrigel Invasion Assay)刺激后的各组细胞用PBS 漂洗3 次。以常规方法用无血清培养基制备单细胞悬液,5 ×105个细胞/ ml ,每组细胞各分为两部分。胎盘兰拒染实验,细胞活力需大于95 %。
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