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1. 2019-01-13
2. 慢病毒包装的原理
3. “新型武器”:Crispr技术将成新冠病毒的“克星”
4. CRISPR Cas9知识储备第一弹:简介
5. crispr cas9基因敲出质粒转染可以构建稳定细胞株吗

1、2019-01-13

安远天气 2019-01-13 14℃ 9℃ 阴 西北风 2级 基本上的情况，就是这个样子。

年1月13日到2022年10月23日共有1389天。

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所以如果小叔子没有祖父母，外祖父母，他的房产就轮到他的哥哥和姐姐来分割了。嫂子不能直接继承小叔子房产。

浏览2019-01-13春节的来历20字春节起源于殷商时期年头岁尾的祭神祭祖活动。 虞舜时期，舜即位做了天子，在农历正月初一这一天，带领着部下人员，祭拜天地神灵。从此，人们就把这一天当作岁首。这就是农历新年的由来。

2、慢病毒包装的原理

病毒包装的原理，就是有遗传物质有外壳蛋白，在细胞内可以指导二者包成病毒。

慢病毒载体（Lentiviral vector， LVs）是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效的将目的基因（蛋白质编码序列、shRNA或gRNA）导入动物和人的原代细胞或细胞系。

原理 慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。

慢病毒包装简要流程：1）含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3）培养48hrs-72hrs左右，收集含有病毒的上清培养液。4）病毒的纯化和浓缩。

目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个，即gag、pol、rev。

3、“新型武器”:Crispr技术将成新冠病毒的“克星”

Stanley Qi实验室掌握着干扰癌细胞和治疗疾病的Crispr核心技术，采用“PAC-MAN”，通过“导向Crispr鱼雷”对病毒细胞进行攻击，该方法能破坏病毒基因构成，穿透人类细胞，之后利用细胞机制进行自我复制。

CRISPR基因编辑技术检测方法的原理就是向导RNA与新冠病毒的RNA序列相结合后，将RNA切断并释放出荧光粒子，就可以在激光的照射下显示荧光。此前的新冠检测方法首先需要增加新冠病毒的RNA数量，之后才能进入检测环节。

不过新冠病毒的键有点多，每个刺基本都是一个键。 地球上的万物是相生相克的，在自然界中病毒几乎是所以生物的克星，那么病毒的克星又是什么呢？我认为是生物体内的免疫系统。

年2月15日，张锋团队在美国《科学》杂志发表了论文，揭示了他们首次在体外将CRISPR/Cas9基因编辑技术对小鼠和人类细胞的特定基因完成了精确的切割，意味着将该技术改进并应用于哺乳动物和人类细胞。

张锋博士的新突破又是什么？本文将带您快速了解CRISPR/Cas技术的原理与应用。CRISPR/Cas技术是什么？CRISPR/Cas系统是一种原核生物的免疫系统，用来抵抗外源遗传物质的入侵，比如噬菌体病毒和外源质粒。

4、CRISPR Cas9知识储备第一弹:简介

Crispr-CAS9系统最初在细菌和古生菌中观察到，作为一种适应性微生物免疫系统，提供对外来病毒和质粒的获得性免疫；已测序物种中，40%的细菌和90%的古生菌可观察到CRISPR基因座，且细菌中可能存在一个以上的基因座。

一旦Cas9在PAM附近找到了潜在的靶序列，会开始解双螺旋并继续检查剩余的靶序列。磷酸锁环稳定解旋的目标DNA，且第一个碱基开始翻转向上，与guide RNA碱基配对。而Cas9继续与非靶链上的翻转碱基作用，促进双螺旋解开。

Cas9蛋白（含有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。

CRISPR Cas9起源 CRISPRCas9系统最初在细菌和古细菌中被发现，是一种细菌应对外来病毒或质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制。

5、crispr cas9基因敲出质粒转染可以构建稳定细胞株吗

构建sgRNA-Cas9稳转株 利用慢病毒包装体系构建sgRNA-Cas9稳转株，进行嘌呤筛选 筛细胞克隆并进行qPCR验证 嘌呤霉素筛选后分离细胞克隆。

构建sgRNA和dCas9-target 质粒 构建dCas9-target稳转株 稳转株蛋白构建完成后，用flag抗体或目的蛋白抗体检测稳转株是否构建成功，如果载体上有荧光蛋白，可用荧光检测细胞株是否构建成功。

研究人员设计了3个靶向HPV16E7的sgRNAs（ 用 红棉CRISPR基因编辑系统 设计 ），并构建了CRISPR/Cas9质粒。

CRISPR-Cas9基因编辑技术及应用… tracrRNA-crRNA在被融合为单链向导RNA（sgRNA）时也可以发挥指导Cas9的作用。

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