包装病毒时质粒浓度低-质粒包病毒步骤
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1、质粒提取浓度太低是什么原因
———很可能是细菌发生溶菌,可减少培养时间、降低培养温度试试看,通常降低培养温度 会使细菌生长更加稳定;同时也可以试试平板培养,培养后,用PBS将菌落洗下,再进行质粒的提取,固体培养基上细菌生长的要好一些。
通常是因为在细菌扩增培养过程中混有杂菌,导致含有目的质粒的细菌比例下降。通常挑克隆小规模培养后提质粒通常发现不了,质粒产量也很不错,但一扩增培养质粒就提不出来了。
首先,你用标准DNA样品验证下是不是仪器的问题,如果没问题,那就是提取过程有问题。
不是260/230,是260/280,如果比值是7的话,那说明样品里面还有蛋白,有可能是菌体量太大,也可能和试剂盒质量有关系,一般质粒小抽的试剂盒产量都不是很高的,浓度有100ng/ul就不错了。
2、质粒提取浓度太低是什么原因
———很可能是细菌发生溶菌,可减少培养时间、降低培养温度试试看,通常降低培养温度 会使细菌生长更加稳定;同时也可以试试平板培养,培养后,用PBS将菌落洗下,再进行质粒的提取,固体培养基上细菌生长的要好一些。
通常是因为在细菌扩增培养过程中混有杂菌,导致含有目的质粒的细菌比例下降。通常挑克隆小规模培养后提质粒通常发现不了,质粒产量也很不错,但一扩增培养质粒就提不出来了。
首先,你用标准DNA样品验证下是不是仪器的问题,如果没问题,那就是提取过程有问题。
不是260/230,是260/280,如果比值是7的话,那说明样品里面还有蛋白,有可能是菌体量太大,也可能和试剂盒质量有关系,一般质粒小抽的试剂盒产量都不是很高的,浓度有100ng/ul就不错了。
说明有机试剂没有挥发干净。晾干的时候应该多放置一会。
3、质粒浓度低的原因
收菌次数不足、裂解不充分、过柱子时吸附时间过短。收菌次数不足:收菌次数较少,相对而言质粒的量也会减少。增加收菌次数可以相对提高质粒的量,从而增加质粒浓度。适当增加裂解液的量也有助于提高质粒浓度。
通常是因为在细菌扩增培养过程中混有杂菌,导致含有目的质粒的细菌比例下降。通常挑克隆小规模培养后提质粒通常发现不了,质粒产量也很不错,但一扩增培养质粒就提不出来了。
说明有机试剂没有挥发干净。晾干的时候应该多放置一会。
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