腺病毒包装转染步骤(腺病毒包装原理)
大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于腺病毒包装转染步骤的问题,于是小编就整理了4个相关介绍腺病毒包装转染步骤的解答,让我们一起看看吧。
1、慢病毒包装的原理
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。
慢病毒载体(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统,它能高效的将目的基因(蛋白质编码序列、shRNA或gRNA)导入动物和人的原代细胞或细胞系。
原理 慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。
慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。
目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个,即gag、pol、rev。
2、慢病毒与腺病毒的比较
慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种(单链RNA病毒)。
真核表达载体包括腺病毒载体和慢病毒载体,在真核细胞内用于表达目的蛋白的载体都可以叫做真核载体。腺病毒载体携带外源基因较大,可瞬时高表达。慢病毒载体携带外源基因较小些,但可以重组入细胞基因组,稳定高表达。
慢病毒包装系统一般都是三质粒或四质粒包装系统。其中四质粒系统比三质粒系统在生物安全性上更好一些,所以应用较多。
不同血清型可以相对特异性的感染心脏,肝脏,骨骼肌等。腺相关病毒是RG1(最安全级别)的基因治疗载体,完全无具有潜在致病性。而腺病毒是RG2,慢病毒是RG2,逆转录病毒是RG3 。
腺病毒的感染大多是由于以下途径导致的飞沫传染:导致呼吸道感染症状的血清型通常会经由飞沫传染。粪口传染:因为腺病毒家族有感染肠道细胞的倾向,所以有时可能透过污染的水、食物而感染。
3、腺病毒的生活周期
腺病毒是一种常见的致病微生物。这种病毒感染广泛存在于各个年龄段的人群中。它通常发生在六个月到五岁之间,尤其是两岁以下的儿童。作为一种呼吸道病毒,“腺病毒”现在是一种经常发生在人们生活中的疾病。
第一,抽血性膀胱炎在男孩子身上出现的几率比较大,通常会有一星期左右的潜伏期,同时会出现排尿困难,尿频以及肉眼血尿的症状,症状的时间也会持续2~3星期。
在每年4月份到8月份的时候,都是腺病毒感染的高发季,所以家长们在发现的时候一定要带,孩子早就医中间要多观察,家里面要保持通风,让孩子多休息。
慢病毒操作较方便,周期也短。但腺病毒表达快,1-2天,慢病毒要2-4天。
腺病毒的结构蛋白在细胞核内聚集形成病毒衣壳,病毒的基因组被包装进去,形成有感染能力的病毒颗粒,并最终裂解宿主细胞被释放出去,完成腺病毒的生活周期。
4、腺病毒包装技术的简介
腺病毒具有嗜上皮细胞特性,因大多数肿瘤细胞均属于上皮细胞,这使得腺病毒非常适合应用于基因治疗领域。 病毒滴度高,可用于动物水平的实验。 有较好的生物安全性。
重组腺病毒的包装制备:重组腺病毒是从由侵染色斑组成单位(pfu)中分离获得的。一个单色斑是线性载体质粒转染后在20×15 cm板上由293A细胞连续侵染后被挑选和扩增形成的。
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。
病毒包装,是一种基因诊断、基因治疗技术。主要是将外源基因DNA或RNA片段导入靶细胞或组织,研究靶基因的上调或抑制情况。
到此,以上就是小编对于腺病毒包装转染步骤的问题就介绍到这了,希望介绍关于腺病毒包装转染步骤的4点解答对大家有用。
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