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包装慢病毒转染试剂加多少-慢病毒转染需要几级实验室

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  1. 293T细胞是怎么包装病毒的
  2. 10cm皿转染质粒用量
  3. 1,慢病毒转染时需要哪些防护措施

1、293T细胞是怎么包装病毒的

慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例):第一天:用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天:转染293FT细胞。

T细胞是由293 细胞派生, 表达SV40 大T抗原的人肾上皮细胞系, 被广泛应用于瞬时转染以过表达各种目标蛋白, 或是用以包装病毒。 293T 为贴壁细胞, 这种细胞对培养基的营养成分要求并不高。

将细胞培养瓶竖立放置,吸走培养基,如果培养基中的脱落细胞较多,说明细胞现在很容易脱落,只要加入1ml的PBS EDTA(0.02%),来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落,加入10mlMEM,混匀,不能吹打,分装2瓶。

腺病毒可以在293A细胞中进行转录,表达并可进行包装复制出大量高滴度病毒。293T是一种逆转录包装表达细胞,我做过也可进行表达,但还没有具体鉴定表达后的病毒是否可用。

要充分利用慢病毒包装系统,就需要具备一个HEK293T宿主细胞系,这个细胞系要易于转染并且可以高水平表达病毒蛋白质。

2、10cm皿转染质粒用量

毫升。培养基的用量与皿直径有关,直径为5厘米,的皿加入2毫升培养基,直径为6厘米的皿加入3毫升培养基,直径为10厘米的皿加入6毫升培养基。

ml。直径5厘米皿2ml培养基,6厘米3ml,10厘米6ml,6孔板每个孔2ml,12孔板1ml,往后依次减半,因此10cm皿种板到6孔板每个孔加多少2ml。培养皿是一种浅透明带盖培养皿生物学家使用保持生长培养基中,细胞可以被培养。

微克。在免疫共沉淀的实验中可知,5cm皿质粒用量5微克,6cm皿3微克。微克是质量单位,符号μg,1μg等于一百万分之一克。等于10的-6次方克。

cm皿加入约8ml培养基。培养皿是一种用于微生物或细胞培养的实验室器皿,由一个平面圆盘状的底和一个盖组成,一般用玻璃或塑料制成。培养皿质地脆弱、易碎,故在清洗及拿放时应小心谨慎、轻拿轻放。

两种方法都需要在转染24h前进行细胞传代,且细胞密度达到60ml培养皿的60%-70%方可进行转染实验。而细胞复苏后,细胞未达到最佳的状态,活力为完全恢复,细胞密度未达到要求,故而不可用复苏细胞直接加质粒进行实验。

3、1,慢病毒转染时需要哪些防护措施

转染效率:慢病毒较高慢病毒可以实现稳定转染,腺病毒是瞬时转染包装量:慢病毒可以包装4kb左右,不超过8kb的外源基因,腺病毒可以包装8kb左右外源基因慢病毒操作较方便,周期也短。

第八:打疫苗,很重要。接种疫苗是预防疾病最经济、最有效、最便捷的手段。防控新冠病毒,接种疫苗和个人防护一个都不能少。凡是符合接种条件的人员要积极接种新冠病毒疫苗,为构建免疫屏障贡献一臂之力。

疫情防控的措施:尽量减少外出活动,外出佩戴口罩。主动做好健康监测,自觉发热时主动测量体温。若出现可疑症状,应主动戴上口罩及时就近就医。办公场所要注意加强通风清洁,配备洗手液、消毒剂等防护用品。

要求所有的居民在疫情期间尽量不要去人群比较密集的场所,或者是不要去密闭场所。

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