慢病毒包装怎么防护的呢(慢病毒包装怎么防护的呢视频)
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- 慢病毒包装和转染实验的安全性如何?是否一定要在生物安全柜中进行?_百 ...
- 慢病毒包装的原理
- 如何利用好慢病毒感染的原理和特点?
- 病毒包装-慢病毒
1、慢病毒包装和转染实验的安全性如何?是否一定要在生物安全柜中进行?_百 ...
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。
综上特点决定了其应用、意义:用慢病毒载体携带目的基因比用质粒瞬时转染更适于稳转株构建。
安全设备和个体防护 1在实验室中所有感染性材料的操作都必须在Ⅲ级生物安全柜中进行。如果工作人员穿着整体的由生命维持系统供气的正压工作服,则相关操作可在Ⅱ级生物安全柜中进行。
生物安全等级通常可安全进行相关研究工作的条件的整合,与不同工作中的生物安全要求相匹配。控制生物安全风险的根本措施,就是根据生物安全评估结果,为所要开展的工作设定相应的生物安全等级。
那是因为可能内部环境温度太高或者是湿度太大,所以才会出现报警的响声。
2、慢病毒包装的原理
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。
慢病毒载体(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统,它能高效的将目的基因(蛋白质编码序列、shRNA或gRNA)导入动物和人的原代细胞或细胞系。
原理 慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。
慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。
目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个,即gag、pol、rev。
3、如何利用好慢病毒感染的原理和特点?
由于EnvirusTM对病毒的吸附和独有的浓缩功能,通过物理作用将病毒大量富集在细胞表面,大大增加病毒与细胞的接触,最大限度促进病毒感染细胞,通常情况下,比不用增强剂, 提高感染效率几倍到几十倍不等 。
确定合适的MOI值 过高的MOI会对细胞毒性太大。建议降低MOI值或者重新确定最佳MOI值。过低的MOI值直接影响病毒的感染效率。细胞状态 感染前确保细胞状态良好,若细胞感染前状态较差,感染后容易出现死亡。
另外,有效提高病毒转染效率是病毒转染细胞的关键。可使用engreen的病毒感染增强剂Envirus,可有效提高病毒感染细胞的效率。
慢病毒载体的研究发展得很快,研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。
4、病毒包装-慢病毒
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。
慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。
目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个,即gag、pol、rev。
慢病毒载体不表达任何HIV-1蛋白,免疫原性低,在注射部位无细胞免疫反应,体液免疫反应也较低,不影响病毒载体的第2次注射。
慢病毒包装简介及其用途 慢病毒( Lentivirus )载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷 I 型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
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