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腺病毒穿梭质粒的包装信号,腺病毒载体有毒吗

腺病毒穿梭质粒的包装信号,腺病毒载体有毒吗

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  1. 腺病毒包装技术的简介
  2. 腺病毒载体的作用机制
  3. 什么是腺病毒?
  4. ...E1/E3及复制相关基因的 Ad5,仅保留了ITR和包装信号序列

1、腺病毒包装技术的简介

腺病毒具有嗜上皮细胞特性,因大多数肿瘤细胞均属于上皮细胞,这使得腺病毒非常适合应用于基因治疗领域。 病毒滴度高,可用于动物水平的实验。 有较好的生物安全性。

重组腺病毒的包装制备:重组腺病毒是从由侵染色斑组成单位(pfu)中分离获得的。一个单色斑是线性载体质粒转染后在20×15 cm板上由293A细胞连续侵染后被挑选和扩增形成的。

病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。

病毒包装,是一种基因诊断、基因治疗技术。主要是将外源基因DNA或RNA片段导入靶细胞或组织,研究靶基因的上调或抑制情况。

能自行复制,有效进行增殖,产生滴度高;与人类基因同源;能在同一细胞株或组织中设计表达多个基因。

2、腺病毒载体的作用机制

典型的腺病毒载体系统如:穿梭质粒pCA13/腺病毒基因组质粒pBHG11/包装细胞293细胞。

腺病毒载体疫苗:将病毒的核酸片段装到经过安全处理的腺病毒身上,再注射到人体内。注射后,免疫系统会识别出这个病毒抗原,激活机体免疫反应获得免疫力,可以最大限度地发挥病毒核酸的抗原活性,激发身体的免疫作用。

其主要应用就是通过将外源基因插入腺病毒的基因组中,将腺病毒转化为一个基因表达载体,在活细胞内表达外源基因,从而实现治疗和预防。强生腺病毒载体作为一种广泛使用的基因载体,其安全性和稳定性是非常重要的考虑因素。

腺病毒载体疫苗的作用原理是将新冠病毒的刺突糖蛋白(S蛋白)基因重组到复制缺陷型人5型腺病毒基因内,基因重组腺病毒在体内表达新冠病毒S蛋白抗原,诱导机体产生体液免疫和细胞免疫应提供双重的免疫保护。

3、什么是腺病毒?

腺病毒是一种无外壳的双链dna病毒,基因组长约36kb,衣壳(capsid)呈规则的20面体结构,直径约80-110nm。

腺病毒 Adenoviruses 可感染人和畜 、禽的一种DAN病毒 。又称APC病毒 。某些型的人腺病毒接种新生地鼠可诱生肿瘤,在医学和兽医学上都有研究价值。病毒粒外形呈立体对称的二十面体,直径70 ~ 90 纳米 ,无包膜。

腺病毒(adenovirus)是一种没有包膜的直径为70~90 nm的颗粒,由252个壳粒呈20面体 排列构成。每个壳粒的直径为7~9 nm。衣壳里是线状双链DNA分子,约含7kb,两端各有长约100 bp的反向重复序列。

腺病毒,大名又叫“人腺病毒”,起初是从 健康 人萎缩的扁桃腺组织中分离培养出来的。 和鼻病毒等其他病毒一样,腺病毒都是 儿童急性呼吸道传染病 最常见的元凶之一。

4、...E1/E3及复制相关基因的 Ad5,仅保留了ITR和包装信号序列

第一代腺病毒载体:一般将E1或E3基因缺失的腺病毒载体称为第一代腺病毒载体,此类型载体在未经过纯化时可引发机体产生较强的炎症反应和免疫反应,纯化后可以安全使用,体内表达周期可达4周。

也保留了腺病毒的包装信号φ(194~358bp);pBHG11则保留了腺病毒基因组的绝大部分,但是缺失了包装信号φ、0.5~7图距(mu)部分的E1区、75~82mu的E3区,293细胞是整合有Ad5 E1基因的人胚肾细胞系。

两个末端倒转重复序列(ITR);其中包括了病毒复制起点、包装信号及整合和拯救所必需的顺式元件。 AAV载体质粒和辅助质粒共转染293细胞,并加辅助病毒(腺病毒或单纯疱疹病毒)感染。 单纯疱疹病毒载体 HSV 病毒复制起点ori; 病毒包装信号pac 。

复制到达复制终止序列,在终止蛋白作用下终止复制。

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