293t能包装逆转录病毒吗-plate细胞包装逆转录病毒
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1、团队作案HEK293,史上最强搬砖细胞
对于做分子生物学实验的人来说,293细胞再熟悉不过了。常在文献中看到不同的293名字,全然没考虑过293细胞原来还是团队作案,分身无数。
如果没多少血的话,你可以用最吸吮下,反正就是不要有细菌残留。其实你也不必太担心,因为在实验室做的微生物实验菌,一般都不是什么高致病菌,就算高级实验室也不能做高致病菌实验。
和HEK293是同一种细胞,它们的全称是Human Embryonic Kidney 293 cell 即人类胚胎肾细胞。293还有一种衍生的293T细胞:293细胞中转入SV40T-antigen基因形成的高转衍生株,即为293T细胞系。
建议重新铺板,否则影响转染试剂DNA复合物与细胞接触。另,老师您也可以尝试用悬浮转染的方法。义翘神州的HEK293无血清瞬时转染表达系统套装产品,价格别国外试剂实惠了一个数量级。并且有国内著名科研院所、团队实力验证。
目前也常被用于将 siUch-L1 从 Ambion 传递到HEK-293 细胞,在哺乳动物细胞中导入Accell siRNA 等寡核苷酸也会用到该转染介质。国外有科研团队也在尝试使用 RNAiMax将FlexiTube 和 SMARTpool siRNA 转染到 HUVEC 细胞中。
2、腺病毒是否能在293细胞中复制?
细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系,293T细胞由293细胞派生,同时表达SV40大T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。用Ca3(PO4)2转染效率可高达50%。
pBHG11因为缺失包装信号及E1区而不能复制,pCA13带有包装信号及E1的侧翼序列,但是缺失E1区及腺病毒绝大部分基因组,同样不能复制。外源目的基因插入pCA13后,与pBHG11共转染,进入293细胞。
科学家得到一个稳定的可以快速生长的293单克隆细胞株,自此HEK293 or 293细胞(ATCC CRL-1573)诞生。
腺病毒扩增,也只能在293A里扩增,其他的细胞不行.慢病毒载体多是由HIV改造的,野生型的慢病毒载体是可以复制的,但是用于实验室就只能通过改造使其变为复制缺陷型的。
细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞,表现出典型的腺病毒转化细胞的表型,细胞允许Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。哺乳细胞的大规模培养方式有三种:贴壁培养、微载体培养、无血清悬浮培养。
3、慢病毒包装的原理
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。
慢病毒载体(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统,它能高效的将目的基因(蛋白质编码序列、shRNA或gRNA)导入动物和人的原代细胞或细胞系。
原理 慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。
慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。
4、包装细胞293,293T,GP2-293,Phoenix有什么不同
养293细胞和293T一样。以293T为例,预先准备3个T150瓶的293T细胞,培养基为DMEM 10% FBS,1% Glutamax ,1% 青霉素-链霉素。 将细胞分到12分到12个T150瓶中,每瓶的细胞密度是8×106个。
描述 表达SV40大T抗原,可用于转染和作为包装细胞;用于瞬时转染时可高表达AP融合蛋白。
和HEK293是同一种细胞,它们的全称是Human Embryonic Kidney 293 cell 即人类胚胎肾细胞。293还有一种衍生的293T细胞:293细胞中转入SV40T-antigen基因形成的高转衍生株,即为293T细胞系。
细胞名称 293 和 293T 种属 人 组织来源 形态特点 上皮细胞 致瘤性 产物或抗原 大T抗原 染色体核型 亚三倍体人细胞系。染色体众数为64,30%的细胞有64 条染色体。2%的细胞染色体数目更多。
细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系,293T细胞由293细胞派生,同时表达SV40大T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。用Ca3(PO4)2转染效率可高达50%。
5、慢病毒包装的简要流程
慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例):第一天:用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天:转染293FT细胞。
慢病毒包装简要流程:1) 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。2) 慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3) 培养 48hrs – 72hrs 左右,收集含有病毒的上清培养液。
慢病毒包装简介及其用途 慢病毒( Lentivirus )载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷 I 型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个,即gag、pol、rev。
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