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1. 慢病毒感染技术原理
2. 病毒为什么要包装后才能转染细胞
3. 如何利用好慢病毒感染的原理和特点?
4. 包装好的慢病毒感染原代细胞时,加polybrene,有没有先后顺序

1、慢病毒感染技术原理

并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。在研究RNAi方面，慢病毒技术是最为有效的一种解决方案。

利用HIV病毒将自身基因组插入整合到宿主基因组的特性。在293T细胞内先转染三个质粒，分别为HIV病毒合成所需要的组分（改造过的），其中一个带有装配入病毒衣壳信号序列的质粒上插入要稳转的序列。

Polypene 的选择：Polypene 是带正电的小分子，与细胞表面的阴离子结合，提高慢病毒对细胞的感染效率，通常加入polypene 能提高感染效率2～10倍。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

慢病毒是一种慢性疾病，感染后可导致机体免疫系统受损，从而使病毒在体内持续繁殖和扩散。病毒感染后，机体产生的抗体和免疫细胞不能完全清除病毒，导致病毒在体内长期存在，从而引起颗粒聚集。

2、病毒为什么要包装后才能转染细胞

病毒包装的原理，就是有遗传物质有外壳蛋白，在细胞内可以指导二者包成病毒。

病毒载体构建完成后，可以不进行包装，直接转染细胞，也可以到达构建稳转株或者基因敲除的效果，但是效率非常低，因为有些细胞非常难转染。所以要先转染好转染的细胞，包装成病毒，然后再感染相应的靶细胞，就可以达到较好的效果。

克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。

包膜上的刺突蛋白是识别宿主细胞的重要工具，所以失去了包膜的HIV病毒不再具有侵染力，因此HIV对表面活性剂敏感。

第一步是表达与复制相关的蛋白，称为潜伏期。第二步是表达结构蛋白，如外壳蛋白，并利用复制酶对核酸进行大量的复制，为增长期。第三步是进行装配，将核酸和结构蛋白组装形成病毒粒体，转运到其它未侵染的细胞中。

3、如何利用好慢病毒感染的原理和特点?

由于EnvirusTM对病毒的吸附和独有的浓缩功能，通过物理作用将病毒大量富集在细胞表面，大大增加病毒与细胞的接触，最大限度促进病毒感染细胞，通常情况下，比不用增强剂， 提高感染效率几倍到几十倍不等 。

确定合适的MOI值 过高的MOI会对细胞毒性太大。建议降低MOI值或者重新确定最佳MOI值。过低的MOI值直接影响病毒的感染效率。细胞状态 感染前确保细胞状态良好，若细胞感染前状态较差，感染后容易出现死亡。

另外，有效提高病毒转染效率是病毒转染细胞的关键。可使用engreen的病毒感染增强剂Envirus，可有效提高病毒感染细胞的效率。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

慢病毒也被广泛地应用于表达RNAi的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的siRNA半衰期短，体外合成siRNA对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

4、包装好的慢病毒感染原代细胞时,加polybrene,有没有先后顺序

Polypene 是带正电的小分子，与细胞表面的阴离子结合，提高慢病毒对细胞的感染效率，通常加入polypene 能提高感染效率2～10倍。

UbiC在一般细胞中都表达，但表达活性一般要低一些，它在神经元等原代细胞的感染中是最好的。 12-24小时后，将培养上清丢掉同时除去没有感染细胞的病毒，更换为新鲜的培养基。

非病毒载体，选择比较好的转染试剂，推荐QIAGEN的superfect转染试剂，对原代细胞还可以。采用电转。

Polybrene是带正电的小分子，抵消病毒囊膜和细胞膜表面的阴离子，提高慢病毒对细胞的感染效率，通常加入polybrene能提高感染效率2～10倍。但是polybrene对部分细胞有毒性，可1～10μg/ml，6-24h内无毒为标准，实验摸索浓度。

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