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1. 慢病毒载体的存在问题
2. 慢病毒包装的简要流程
3. 2020-12-03 慢病毒

1、慢病毒载体的存在问题

由于瞬时转染中过量的质粒和转染试剂的残留，会引起终产物的污染。因此，稳定的慢病毒载体生产细胞株运行而生。慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

这种情况是由于慢病毒对该细胞有一定的毒性作用，需要调整并降低感染的MOI值，并且在感染后4小时、8小时、12小时对细胞进行观察，若发现细胞状态变差时，则需要立刻对细胞进行换液操作，使用新鲜的完全培养液替换病毒感染培养液。

优点：转导效率高、复杂的装配过程由细胞完成、不同病毒载体具有不同表达特点。根据病毒载体在主细胞中的存在情况分为瞬时表达病毒载体和稳定表达病毒载体。

现在市售的慢病毒因敲除掉病毒增殖致病的关键元件，所以认为没有直接危害，但是潜在的生物危害是不能忽视的。故建议在操作慢病毒时，要做好防护措施，尽量避免接触到慢病毒载体以及其相关溶液等等，生物垃圾更是不能随意丢弃。

2、慢病毒包装的简要流程

慢病毒包装简要程序（以六孔板中的1孔为例）：第一天：用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞，2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天：转染293FT细胞。

慢病毒包装简要流程：1） 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。2） 慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3） 培养 48hrs – 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。

慢病毒包装简介及其用途 慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个，即gag、pol、rev。

3、2020-12-03 慢病毒

慢病毒载体（lentivirus vector， LV）是一类来源于逆转录病毒的载体， 慢病毒之所以是称为慢病毒，是因为感染的主要临床特点是在出现典型的临床症状以前，经历较长的潜伏期，之后缓慢发病。gag、pol和env。

存储条件及期限 置于-80℃冰箱保存；使用病毒时，取出置于4℃融化后进行细胞感染。避免反复冻融降低病毒滴度 每次冻融会降低病毒滴度10%~20%左右；为避免反复冻融建议按照每次的使用量进行分装。

慢病毒操作较方便，周期也短。但腺病毒表达快，1-2天，慢病毒要2-4天。

慢病毒（Lentivirus） 载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

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