大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于293T包装病毒的上清不变黄的问题，于是小编就整理了4个相关介绍293T包装病毒的上清不变黄的解答，让我们一起看看吧。

1. lentix 293t特点
2. 慢病毒包装的原理
3. 293T细胞是怎么包装病毒的
4. 如何培养293T细胞?

1、lentix 293t特点

lentix293t它可高度转染并高水平表达病毒蛋白质，也可稳定表达猿猴病毒40（SV40）大T抗原。要充分利用慢病毒包装系统，就需要具备一个HEK293T宿主细胞系，这个细胞系要易于转染并且可以高水平表达病毒蛋白质。

增加悬浮培养规模相对比较简单，只要增加体积就可以了。深度超过5mm，需要搅动培养基，超过10cm，还需要深层通入CO2和空气，以保证足够的气体交换。通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内的培养方法。

2、慢病毒包装的原理

病毒包装的原理，就是有遗传物质有外壳蛋白，在细胞内可以指导二者包成病毒。

慢病毒载体（Lentiviral vector， LVs）是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效的将目的基因（蛋白质编码序列、shRNA或gRNA）导入动物和人的原代细胞或细胞系。

原理 慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。

慢病毒包装简要流程：1）含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3）培养48hrs-72hrs左右，收集含有病毒的上清培养液。4）病毒的纯化和浓缩。

目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个，即gag、pol、rev。

3、293T细胞是怎么包装病毒的

慢病毒包装简要程序（以六孔板中的1孔为例）：第一天：用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞，2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天：转染293FT细胞。

T细胞是由293 细胞派生， 表达SV40 大T抗原的人肾上皮细胞系， 被广泛应用于瞬时转染以过表达各种目标蛋白， 或是用以包装病毒。 293T 为贴壁细胞， 这种细胞对培养基的营养成分要求并不高。

将细胞培养瓶竖立放置，吸走培养基，如果培养基中的脱落细胞较多，说明细胞现在很容易脱落，只要加入1ml的PBS EDTA（0.02%），来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落，加入10mlMEM，混匀，不能吹打，分装2瓶。

腺病毒可以在293A细胞中进行转录，表达并可进行包装复制出大量高滴度病毒。293T是一种逆转录包装表达细胞，我做过也可进行表达，但还没有具体鉴定表达后的病毒是否可用。

4、如何培养293T细胞?

．加足量的培养液， 分装到新的培养瓶中。值得注意的是， 293T细胞的贴壁性不强， 轻微的干扰就可能使它们脱落。所以， 在更换新鲜培养液或者用PBS冲洗的时候应该小心地添加新的培液进去， 以液体不冲打到贴壁的细胞为好。

在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。倒去细胞上清液，加入D-Hank；s液洗去残留的培养基。加入0.25%的胰酶，消化10-20s后倒去。镜下观察细胞变圆，细胞间间隙加大时，加入新鲜培养基吹打混匀。

⑴光照：离体培养的植物细胞对光照条件不甚严格，因为细胞生长所需要的物质主要是靠培养基供给的。

养293细胞和293T一样。以293T为例，预先准备3个T150瓶的293T细胞，培养基为DMEM 10% FBS，1% Glutamax ，1% 青霉素-链霉素。 将细胞分到12分到12个T150瓶中，每瓶的细胞密度是8×106个。

原代动物细胞培养：实验材料要新鲜，从活体分离材料后要低温保存，并尽快进行细胞分离实验。无菌操作。操作时用的培养液，可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素。用酶法分离细胞时，注意酶液的浓度和控制消化时间。

到此，以上就是小编对于293T包装病毒的上清不变黄的问题就介绍到这了，希望介绍关于293T包装病毒的上清不变黄的4点解答对大家有用。