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包装病毒培养基(病毒培养基的种类和要求)

包装病毒培养基(病毒培养基的种类和要求)

大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于包装病毒培养基的问题,于是小编就整理了3个相关介绍包装病毒培养基的解答,让我们一起看看吧。

  1. 293T细胞是怎么包装病毒的
  2. 培养基对病毒包装的影响
  3. 什么是293T细胞的培养?

1、293T细胞是怎么包装病毒的

慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例):第一天:用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天:转染293FT细胞。

T细胞是由293 细胞派生, 表达SV40 大T抗原的人肾上皮细胞系, 被广泛应用于瞬时转染以过表达各种目标蛋白, 或是用以包装病毒。 293T 为贴壁细胞, 这种细胞对培养基的营养成分要求并不高。

将细胞培养瓶竖立放置,吸走培养基,如果培养基中的脱落细胞较多,说明细胞现在很容易脱落,只要加入1ml的PBS EDTA(0.02%),来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落,加入10mlMEM,混匀,不能吹打,分装2瓶。

腺病毒可以在293A细胞中进行转录,表达并可进行包装复制出大量高滴度病毒。293T是一种逆转录包装表达细胞,我做过也可进行表达,但还没有具体鉴定表达后的病毒是否可用。

2、培养基对病毒包装的影响

不可以。病毒是寄生在活体上的生物,而培养基是没有生命的有机物或无机物,病毒在上面不能生存。病毒的结构是有一个DNA,和蛋白质外壳,和其它功能性的附属结构。

病毒是属于寄生类生物,一旦脱离寄主,便失去了藏身之所和能量的供给,所以病毒一定要寄生在活细胞中,而固体或液体培养基都营养物质配置而成,没有生物活性,所以不能用来培养病毒。

血清饥饿可以增加细胞的胞吞胞饮作用。但这不是必须的。

病毒应该不能生长在培养基上。它一定要种植在细胞里面。因为病毒没有什么细胞器,只有外壳,遗传物质(RNA,DNA)还有一些蛋白。没有提供能量、蛋白合成的细胞器,所以只能依赖寄主细胞提供这些东西。

3、什么是293T细胞的培养?

⑴血清:动物细胞离体培养常常需要血清。最常用的是小牛血清。血清提供生长必需因子,如激素、微量元素、矿物质和脂肪。有一天人们真正学会了配制和血清一样的培养液,那时血清才可被取代。

将细胞培养瓶竖立放置,吸走培养基,如果培养基中的脱落细胞较多,说明细胞现在很容易脱落,只要加入1ml的PBS EDTA(0.02%),来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落,加入10mlMEM,混匀,不能吹打,分装2瓶。

随着传代的次数增加,293T细胞会出现生长状态下降,出现突变等。所以要在细胞购进时就进行大量冻存,以保证实验的稳定性和持续性。在细胞对数生长期进行冻存,增加细胞复苏成活率。

悬浮培养指的是一种在受到不断搅动或摇动的液体培养基里,培养单细胞及小细胞团的组织培养系统,是非贴壁依赖性细胞的一种培养方式。某些贴壁依赖性细胞经过适应和选择也可用此方法培养。

养293细胞和293T一样。以293T为例,预先准备3个T150瓶的293T细胞,培养基为DMEM 10% FBS,1% Glutamax ,1% 青霉素-链霉素。 将细胞分到12分到12个T150瓶中,每瓶的细胞密度是8×106个。

到此,以上就是小编对于包装病毒培养基的问题就介绍到这了,希望介绍关于包装病毒培养基的3点解答对大家有用。

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