大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于慢病毒包装前滴度测定的问题，于是小编就整理了3个相关介绍慢病毒包装前滴度测定的解答，让我们一起看看吧。

1. 慢病毒包装的简要流程
2. 如何生产高滴度的慢病毒
3. 慢病毒滴度的计算

1、慢病毒包装的简要流程

慢病毒包装简要程序（以六孔板中的1孔为例）：第一天：用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞，2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天：转染293FT细胞。

慢病毒包装简要流程：1） 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。2） 慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3） 培养 48hrs – 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。

慢病毒包装简介及其用途 慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个，即gag、pol、rev。

2、如何生产高滴度的慢病毒

一般认为，在转染后的第24~48 h之间，是慢病毒的生产高峰，这时病毒产生速率高于降解速率。可以在这个时间收获第一批慢病毒，此时也是滴度最高的时候。

含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3）培养48hrs-72hrs左右，收集含有病毒的上清培养液。4）病毒的纯化和浓缩。5）分装、-80℃保存。

而cPPT元件则有利于增加病毒的滴度，WPRE和cPPT元件能使蛋白的表达量至少提高4倍。Ploybrene是带正电的小分子，与细胞表面的阴离子结合，提高慢病毒对细胞的感染效率，通常加入polybrene感染效率可以提高2-10倍。

如您在进行慢病毒感染细胞过程中，效率比较低，可以考虑加入Entrvius-LV感染增强剂，EnvirusTM系列产品不含病毒以及蛋白等其他生物来源成分，不参与病毒和细胞的生理过程。

3、慢病毒滴度的计算

按以下公式计算出病毒的TCID50：TCID50/ml=10（a x）×200/ml其中，a=lg（n）；n=感染率高于50%的最接近稀释度；b=n稀释度的感染率；c=低于n的最接近稀释度的感染率；x=（b-50%）/（b-c）。

公式：每分钟滴数=液体的总量（ml）乘以滴系数（滴 ／毫升）除以输液所用的时间（分钟）。

②所谓滴度既病毒悬液的浓度，就是指pfu的数值。③滴度是稀释度的倒数。例如上例中的 1 ：180 的稀释度，其滴度就是 180 。效价是滴度的同义词。效价即滴度，两者通用。

病毒滴度测定中的pfu 与TCID50之间的联系是：1个TCID50 约等于0.7个PFU，即：1 TCID50 ≈ 0.7 PFU。例如：某病毒的滴度为105TCID50/ml，那么它换算成PFU为：105TCID50/ml 7*104PFU/ml。

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