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1. 求教大神,慢病毒包装时三个关键基因gag/pol,VSV-G,REV分别是干什么用...
2. 质粒的作用
3. 病毒包装-慢病毒

1、求教大神,慢病毒包装时三个关键基因gag/pol,VSV-G,REV分别是干什么用...

rev，tat。 rev 主要参与蛋白调节的表达水平， tat 参与蛋白转录的控制，与病毒的长末端重复序列（long terminal repeats， LTRS）结合后促进病毒的所有基因的转录。

多质粒系统指的是慢病毒的包装系统，就三质粒（包装质粒、包膜蛋白质粒、转移质粒）包装系统来说，病毒包装必需的3个蛋白Gag/Pol、Rev、VSV-G分别放置在不同的质粒上，且互相之间没有任何同源序列，就是为了不使其进行重组。

病毒载体可以借助其他病原体的外壳蛋白包装成假病毒，以改变其嗜性。最常用的是疱疹性口腔炎病毒膜融合包膜G糖蛋白（VSV-G） 。其他常见的包膜蛋白来源于狂犬病毒、鼠白血病病毒、埃博拉病毒、杆状病毒、麻疹病毒和纤丝病毒。

慢病毒属于逆转录病毒科，但其基因组结构复杂，除 gag、pol 和 env 这 3 个和单纯逆转录病毒相似的结构基因外，还包括 4 个辅助基因，vif、vpr、nef、vpu 和 2 个调节基因 tat 和 rev 。

2、质粒的作用

质粒是染色体外的遗传因素，它可以进行自我复制，能代代相传，并控制着细胞的一些特性。质粒还有一种特有的性格，它不像其他的一些细胞结构那样安心在一个岗位上工作，它经常跳槽。

正常质粒是闭合的双链DNA。在电泳过程中可能使质粒发生开环，或者由开环解开螺旋变成线形。这三种形态电泳时的分离率不同，分离速度不同，分成三带。闭环（超螺旋），开环，线形的螺旋率依次降低。

质粒具有很强的代谢调控作用，可以调节一定的代谢途径的进行。此外，质粒也有基因修复的作用，主要发挥医学和农业上很多方面的价值。抵抗外部环境的攻击 质粒还可以使细胞抵御外部环境不良因素的影响。

质粒是载体中最重要的一种，存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子。把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术，送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体（Vector）。

3、病毒包装-慢病毒

病毒包装的原理，就是有遗传物质有外壳蛋白，在细胞内可以指导二者包成病毒。

慢病毒包装简要流程：1）含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3）培养48hrs-72hrs左右，收集含有病毒的上清培养液。4）病毒的纯化和浓缩。

目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个，即gag、pol、rev。

慢病毒载体不表达任何HIV-1蛋白，免疫原性低，在注射部位无细胞免疫反应，体液免疫反应也较低，不影响病毒载体的第2次注射。

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