大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于病毒包装细胞转染试剂配方的问题，于是小编就整理了5个相关介绍病毒包装细胞转染试剂配方的解答，让我们一起看看吧。

1. 293T细胞是怎么包装病毒的
2. 细胞转染的常用步骤
3. 如何应对病毒感染细胞效率低的难题?
4. mRNA转染实验步骤
5. 哪位可以分享转染raw 264.7细胞经验?

1、293T细胞是怎么包装病毒的

慢病毒包装简要程序（以六孔板中的1孔为例）：第一天：用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞，2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天：转染293FT细胞。

T细胞是由293 细胞派生， 表达SV40 大T抗原的人肾上皮细胞系， 被广泛应用于瞬时转染以过表达各种目标蛋白， 或是用以包装病毒。 293T 为贴壁细胞， 这种细胞对培养基的营养成分要求并不高。

将细胞培养瓶竖立放置，吸走培养基，如果培养基中的脱落细胞较多，说明细胞现在很容易脱落，只要加入1ml的PBS EDTA（0.02%），来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落，加入10mlMEM，混匀，不能吹打，分装2瓶。

腺病毒可以在293A细胞中进行转录，表达并可进行包装复制出大量高滴度病毒。293T是一种逆转录包装表达细胞，我做过也可进行表达，但还没有具体鉴定表达后的病毒是否可用。

2、细胞转染的常用步骤

电穿孔法转染 使用电场脉冲使细胞膜电穿孔，以便目标分子能够通过细胞膜进入细胞内。操作步骤：将细胞与目标分子混合，置于电穿孔仪的电穿孔室中。施加特定的电脉冲，使细胞膜电穿孔，从而实现目标分子的导入。

转染步骤如下：试验准备：200ul/1mlTip头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。弃掉培养皿中的培养基，用1ml的PBS溶液洗涤两次。

mimic 转染步骤（ 24 孔板） 提前 1 天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。

．加入转染液，摇动培养瓶，使其与细胞充分接触，放入孵箱温育20－40分钟，观察细胞至皱缩变圆为止。

3、如何应对病毒感染细胞效率低的难题?

提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中，以感染时细胞融合度在50%左右为宜（悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度）。

这种情况是由于慢病毒对该细胞有一定的毒性作用，需要调整并降低感染的MOI值，并且在感染后4小时、8小时、12小时对细胞进行观察，若发现细胞状态变差时，则需要立刻对细胞进行换液操作，使用新鲜的完全培养液替换病毒感染培养液。

问题分析： 你好，如果宝宝化验血常规白细胞偏低要考虑为病毒感染引起的，有可能是病毒性感冒，需要抗病毒治疗的。

抗体要发挥抗病毒的作用，前提条件是抗体要识别并结合病毒颗粒。但是，非结构的病毒蛋白不存在于病毒颗粒中（存在于被感染的细胞内），因此，针对这一大类病毒蛋白质的抗体，其实是没有抗病毒作用的。

4、mRNA转染实验步骤

半定量PCR的基本原理 是近年来常用的一种简捷的定量RNA测定方法，通过mRNA反转录成cDNA，再进行PCR扩增目的基因，并测定PCR产物的数量，可以推测样品中特异mRNA的相对数量。

悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×10^5，那么就用2×10^5的细胞进行转染。

设置空白对照组，检验细胞生长状态。设置阴性对照组，无血清培养基 Entranster-E 电转染试剂 阴性siRNA。

在转染实验过程中，需要注意以下几点：A.纯化siRNA：在转染前要确认siRNA的大小和纯度。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15%20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸、小的寡核苷酸、蛋白和盐离子。

5、哪位可以分享转染raw 264.7细胞经验?

先将细胞接种到细胞培养板，细胞汇合度在70%左右，再进行转染。

RAW 267细胞系是合适的转染宿主。细胞将胞饮中性红并吞噬乳胶珠和酵母聚糖。它们能够依赖抗体对绵羊红细胞和肿瘤细胞靶标进行裂解。LPS 或 PPD 治疗2天会刺激红细胞裂解，但不会刺激肿瘤细胞靶标。

细胞接种：一般做转染前一天接种/铺板（细胞计数大约5*10^4cell/ml），使做转染前细胞密度在30-50%。为了能在使用时有较好的转染效果，第一次使用建议您用24孔板做，每孔2ul转染试剂即可。

RAW267细胞本身就是巨噬细胞类型的细胞株啊。本身具有很强的贴壁性和伪足产生性的。

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