大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于慢病毒包装四质粒比例的问题，于是小编就整理了3个相关介绍慢病毒包装四质粒比例的解答，让我们一起看看吧。

1. 10cm皿转染质粒用量
2. 病毒包装的慢病毒
3. 293T细胞是怎么包装病毒的

1、10cm皿转染质粒用量

毫升。培养基的用量与皿直径有关，直径为5厘米，的皿加入2毫升培养基，直径为6厘米的皿加入3毫升培养基，直径为10厘米的皿加入6毫升培养基。

ml。直径5厘米皿2ml培养基，6厘米3ml，10厘米6ml，6孔板每个孔2ml，12孔板1ml，往后依次减半，因此10cm皿种板到6孔板每个孔加多少2ml。培养皿是一种浅透明带盖培养皿生物学家使用保持生长培养基中，细胞可以被培养。

微克。在免疫共沉淀的实验中可知，5cm皿质粒用量5微克，6cm皿3微克。微克是质量单位，符号μg，1μg等于一百万分之一克。等于10的-6次方克。

cm皿加入约8ml培养基。培养皿是一种用于微生物或细胞培养的实验室器皿，由一个平面圆盘状的底和一个盖组成，一般用玻璃或塑料制成。培养皿质地脆弱、易碎，故在清洗及拿放时应小心谨慎、轻拿轻放。

两种方法都需要在转染24h前进行细胞传代，且细胞密度达到60ml培养皿的60%-70%方可进行转染实验。而细胞复苏后，细胞未达到最佳的状态，活力为完全恢复，细胞密度未达到要求，故而不可用复苏细胞直接加质粒进行实验。

2、病毒包装的慢病毒

目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个，即gag、pol、rev。

病毒包装的原理，就是有遗传物质有外壳蛋白，在细胞内可以指导二者包成病毒。

慢病毒载体（ Lentiviral vector ）较逆转录病毒载体有更广的宿主范围，慢病毒能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。

慢病毒包装简要流程：1）含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3）培养48hrs-72hrs左右，收集含有病毒的上清培养液。4）病毒的纯化和浓缩。

慢病毒载体不表达任何HIV-1蛋白，免疫原性低，在注射部位无细胞免疫反应，体液免疫反应也较低，不影响病毒载体的第2次注射。

3、293T细胞是怎么包装病毒的

慢病毒包装简要程序（以六孔板中的1孔为例）：第一天：用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞，2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天：转染293FT细胞。

T细胞是由293 细胞派生， 表达SV40 大T抗原的人肾上皮细胞系， 被广泛应用于瞬时转染以过表达各种目标蛋白， 或是用以包装病毒。 293T 为贴壁细胞， 这种细胞对培养基的营养成分要求并不高。

将细胞培养瓶竖立放置，吸走培养基，如果培养基中的脱落细胞较多，说明细胞现在很容易脱落，只要加入1ml的PBS EDTA（0.02%），来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落，加入10mlMEM，混匀，不能吹打，分装2瓶。

腺病毒可以在293A细胞中进行转录，表达并可进行包装复制出大量高滴度病毒。293T是一种逆转录包装表达细胞，我做过也可进行表达，但还没有具体鉴定表达后的病毒是否可用。

t是淋巴细胞，293T细胞由293细胞通过基因技术派生出的细胞系，是经过腺病毒E1A基因的转染，能表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区。淋巴细胞是白细胞的一种，是体积最小的白细胞。

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