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aav病毒包装滴度测定,aav病毒原理

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  1. 病毒滴度简介
  2. 脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸的疫苗检定
  3. 病毒滴度的计算

1、病毒滴度简介

病毒的滴度(BT): 指单位体积液体中有感染能力的病毒或噬菌体数目。

滴度是病毒表达其感染能力的重要指标。所谓滴度,是指在一定的液态培养基中,以一定倍率将病毒液稀释后,测定所需的稀释倍数。一般而言,滴度越高,病毒的感染能力就越强,对机体的伤害也更大。

所谓病毒滴度即病毒悬液的浓度,就是指pfu的数值。滴度是稀释度的倒数。例如:稀释度(dilution)是溶液被冲淡的程度。例如,1ml血清加1 79ml的生理盐水,则稀释度为180。上例中的180的稀释度,其滴度就是1:180。

滴度,是一种表述浓度的用词,通常在化学,病理学和免疫学中使用。滴度是稀释度的倒数。病毒滴度即病毒悬液的浓度,就是指pfu的数值。

一,采用终点稀释法测定病毒滴度(以96孔板为例)提前一天铺细胞。每孔接种5×103个细胞准备感染。稀释病毒。在10个5mL无菌EP管中各加入900μL无血清Grace培养基,在其外依次标明--2……-9,最后一管作为对照。

2、脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸的疫苗检定

原液检定1 鉴别试验按1项进行。2 病毒滴定按2项进行,病毒滴度应不低于51g CCID〈[50]〉/ml。3 猴体神经毒力试验依法检查(附录Xl L),应符合规定。

口服脊髓灰质炎疫苗糖丸采用脊髓灰质炎Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型减毒株分别接种于人二倍体细胞培养制成的三价疫苗糖丸,颜色为白色。用于预防脊髓灰质炎。

毒种1 名称及来源生产用毒种为脊髓灰质炎病毒I、Ⅱ、Ⅲ型减毒株;可用I、Ⅱ、111型Sabin株,l、Ⅱ、Ⅲ型Sabin纯化株,中Ⅲ2株或经批准的其他毒株。

对照疫苗为口服脊灰减毒活疫苗(OPV)糖丸。接种部位采用婴儿大腿前外侧肌肉注射。本试验对免疫原性主要终点以符合方案人群(PP)进行非劣效性假设检验,并以意向性治疗人群(ITT)分析进行确认。

3、病毒滴度的计算

公式:每分钟滴数=液体的总量(ml)乘以滴系数(滴 /毫升)除以输液所用的时间(分钟)。

氨水滴度换算1滴度=1/20当量浓度=1/20×17克氨/升=0.85克氨/升 也即病毒的毒力,或毒价,衡量病毒滴度的单位有最小致死量(MLD)、最小感染量(MID)和半数致死量(LD50),其中以LD50最常用。

病毒滴度测定中的pfu与TCID50之间的联系是:1个TCID50约等于0.7个PFU,即:1TCID50≈0.7PFU。例如:某病毒的滴度为105TCID50/ml,那么它换算成PFU为:105TCID50/ml 7*104PFU/ml。

②所谓滴度既病毒悬液的浓度,就是指pfu的数值。③滴度是稀释度的倒数。例如上例中的 1 :180 的稀释度,其滴度就是 180 。效价是滴度的同义词。效价即滴度,两者通用。

PFU:plaque forming unit,空斑形成单位。感染性滴度的单位一般表示为PFU/ml。由于测定pfu往往重复性较差,因此近些年许多研究又开始采用TCID50方法来计算病毒的感染单位。因此建议也可使用TCID50法。

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