质粒大小与病毒包装,质粒包病毒步骤
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1、病毒包装,目标细胞感染
慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例):第一天:用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天:转染293FT细胞。
病毒包装实验有毒。病毒包装实验指的是目的基因不能直接整合到大多数真核细胞,常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞,从而使表达满足实验需求。病毒包装实验的实验体是含有病毒的。
病毒包装,是一种基因诊断、基因治疗技术。主要是将外源基因DNA或RNA片段导入靶细胞或组织,研究靶基因的上调或抑制情况。
慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。
2、腺病毒包装技术的技术要点
病毒滴度高,可用于动物水平的实验。 有较好的生物安全性。
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。
能自行复制,有效进行增殖,产生滴度高;与人类基因同源;能在同一细胞株或组织中设计表达多个基因。
病毒包装,是一种基因诊断、基因治疗技术。主要是将外源基因DNA或RNA片段导入靶细胞或组织,研究靶基因的上调或抑制情况。
腺病毒可用Shell vial技术进行快速鉴定。病毒标本经抗生素和离心处理,取上清接种于有细胞的Shell vial培养瓶,孵育1~2天,用特异性六邻体单克隆抗体对其抗原表位进行检测。也可用病人鼻粘膜上皮脱落细胞直接染色检测病毒抗原。
3、质粒与病毒的区别
性质不同,质粒纯化是质粒DNA,病毒纯化是病毒。进入细胞方式不同,质粒通过转染进入目的细胞,病毒通过感染进入目的细胞。
质粒是核外dna,病毒可以是单链或双链dna或rna,一般来说,用病毒更为方便,所以如果可以用病毒,一般都是病毒。
一般分子量较大的质粒属严紧型。分子量较小的质粒属松弛型。质粒的复制有时和它们的宿主细胞有关,某些质粒在大肠杆菌内的复制属严紧型,而在变形杆菌内则属松弛型。
质粒是存在与细胞中的具有一定自主复制能力的环状DNA分子。而病毒则没有自主复制能力,需要整合到宿主基因组上随着宿主基因组的复制而进行复制。因此,二者的区别就在于是否需要整合到宿主细胞基因组中才能完成复制。
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