大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于慢病毒包装滴度检测方法的问题，于是小编就整理了5个相关介绍慢病毒包装滴度检测方法的解答，让我们一起看看吧。

1. 转染293t多长时间能产生慢病毒
2. 慢病毒包装的简要流程
3. 慢病毒的相关实验
4. 慢病毒转染荧光不是100%
5. 慢病毒滴度的计算

1、转染293t多长时间能产生慢病毒

含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化，提取慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3）培养48hrs-72hrs左右，收集含有病毒的上清培养液。4）病毒的纯化和浓缩。5）分装、-80℃保存。

HEK-293T细胞是293T（293tsA1609neo）细胞系（ATCC CRL-11268）的衍生物。细胞持续表达SV40抗原，该细胞常用于转染实验，转染效率较高。

率大大降低；而整个质粒过大，也会导致转染效率降低，进而影响最后的 滴度。收病毒的时机 一般认为，在转染后的第24~48 h之间，是慢病毒的生产高峰，这时病毒产 生速率高于降解速率。

腺病毒作为载体，只能提供一过性的作用，你要过三周再做实验，估计作用会很弱的。你还是先在体外证实了有作用再做动物实验。你可以试试肝内多点lentivirus注射。不能用人的。

2、慢病毒包装的简要流程

慢病毒包装简要程序（以六孔板中的1孔为例）：第一天：用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞，2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天：转染293FT细胞。

慢病毒包装简要流程：1） 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。2） 慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3） 培养 48hrs – 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。

慢病毒包装简介及其用途 慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个，即gag、pol、rev。

3、慢病毒的相关实验

也可以将消化下来的细胞抽提基因组DNA，用滴度测定中介绍的定量PCR方法得到整合病毒和细胞的比例。注意如果是所感染为动物细胞则需要用相应物种的内参基因。当后期实验用的细胞培养面积与预实验不同时，则需要放大感染系统。

Polypene 是带正电的小分子，与细胞表面的阴离子结合，提高慢病毒对细胞的感染效率，通常加入polypene 能提高感染效率2～10倍。

一般认为，在转染后的第24~48 h之间，是慢病毒的生产高峰，这时病毒产生速率高于降解速率。可以在这个时间收获第一批慢病毒，此时也是滴度最高的时候。

转染 高效率的转染也是保证高滴度的关键。在考虑转染条件时，不光要看转染 效率，还要看细胞毒性。事实上，状态好代数低的293T细胞都很容易转 染，因此，在慢病毒包装的转染实验中，我们应该更多地去关注细胞毒性 问题。

4、慢病毒转染荧光不是100%

针对非分裂细胞：如神经元细胞，接种后不再增殖，此时可以按照100%的汇合度进行接种。

感染前一天接种，使得第二天细胞汇合度为30-40%。培养板可以是96孔板（只通过显微镜观察荧光）或是24孔板（通过流式或是定量PCR确定感染比例）。

细胞转染后观察荧光结果：1）转染细胞状态一定要好，这是成败的关键。

慢病毒细胞转染技术存在成本较高，病毒在制备过程中需要极其严格的洁净度和纯度。

一般认为，在转染后的第24~48 h之间，是慢病毒的生产高峰，这时病毒产生速率高于降解速率。可以在这个时间收获第一批慢病毒，此时也是滴度最高的时候。

5、慢病毒滴度的计算

按以下公式计算出病毒的TCID50：TCID50/ml=10（a x）×200/ml其中，a=lg（n）；n=感染率高于50%的最接近稀释度；b=n稀释度的感染率；c=低于n的最接近稀释度的感染率；x=（b-50%）/（b-c）。

公式：每分钟滴数=液体的总量（ml）乘以滴系数（滴 ／毫升）除以输液所用的时间（分钟）。

②所谓滴度既病毒悬液的浓度，就是指pfu的数值。③滴度是稀释度的倒数。例如上例中的 1 ：180 的稀释度，其滴度就是 180 。效价是滴度的同义词。效价即滴度，两者通用。

病毒滴度测定中的pfu 与TCID50之间的联系是：1个TCID50 约等于0.7个PFU，即：1 TCID50 ≈ 0.7 PFU。例如：某病毒的滴度为105TCID50/ml，那么它换算成PFU为：105TCID50/ml 7*104PFU/ml。

输液滴速的计算公式为：每小时输入量=每分钟滴数×60÷滴度系数。输液的正常滴速。正常输液滴速一般要调节在每分钟60次左右，一般不会引起患者不适的临床症状，如果是特殊的药物，输液的滴速要根据医嘱进行调节。

到此，以上就是小编对于慢病毒包装滴度检测方法的问题就介绍到这了，希望介绍关于慢病毒包装滴度检测方法的5点解答对大家有用。