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1. 大家cas9敲除细胞基因,转染cas9后要不要
2. 如何验证crisper cas9效果
3. 2018-12-31

1、大家cas9敲除细胞基因,转染cas9后要不要

简单描述以下前期的思路（其实是我自己在回顾），先准备好需要用的东西：Cas9 backbone质粒，根据基因靶点将sgRNA设计好（顺带设计一下引物），将sgRNA插入到Cas9 backone质粒中，将质粒转入感受态细胞扩增，提取质粒后酶切验证。

细胞转染 在转染前一天，将293细胞以单细胞分散状态种至6孔板中，组别设计为： 293未转染组（negative control），293转染组 。

敲入：gRNA和cas9复合物造成靶位点DNA双链断裂后，细胞以外源携带敲入片段的DONOR作为模板进行同源重组修复（HDR），将敲入片段重组到基因组靶点。

　细胞系的应用：共转染cas9质粒与gRNA 质粒到细胞中，48小时后做突变率的检测，和后续的单克隆培养或细胞株筛选工作。小动物的基因敲除：体外转录cas9和gRNA成RNA，然后显微注射到动物的受精卵中。

2、如何验证crisper cas9效果

Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。

CRISPR-Cas9用途：利用两种修复机制，可以实现基因的插入和敲除。没有模板的情况下，利用NHEJ修复，随机插入或缺失序列造成基因敲除。有模板存在的情况下，可通过HDR修复在剪切位点引入目的修饰基因，实现基因的定点修改。

一般是流式细胞分选，分选出正常基因与被敲除基因，分别对两种基因进行短测序，再进行比对，分析敲除某种基因与不敲除该基因是否对研究课题有影响，然后是有什么样的影响。

使用挑单克隆技术得到多个单克隆细胞系后，就要开始验证敲除，除了蛋白表达水平的检测，最终还是要看测序结果。

将蛋白与无核酸酶的Cas9（Cas9nuclease-null）融合，并表达适当的sgRNA，可靶定任何dsDNA序列，而sgRNA的末端可连接到目标DNA，不影响Cas9的结合。

3、2018-12-31

年用干支纪年法计算，2018年1月1日-2018年2月3日是农历丁酉年，鸡年；2018年2月4日-2018年12月31日是农历戊戌年，狗年。

年10月19日的365天前是2018年10月19日，再向前15天，是10月4日。答案是2018年10月4日。

一九为每年的冬至日开始计算，此后以每九天一个单位，过了九个“九”，刚好八十一天，即为“出九”。

每隔5年普查一次（即除2004年条例发布第一次经济普查为2004年外，以后逢3和逢8年份均为经济普查年），标准时点是为普查年份的12月31日。

作为国内快递行业中首家拥有自有全货机的公司，截至2018年12月31日，顺丰拥有66架全货机、9个枢纽级中转场，49个航空、铁路站点，143个片区中转场，330个集散点。

到此，以上就是小编对于cas9病毒包装的问题就介绍到这了，希望介绍关于cas9病毒包装的3点解答对大家有用。