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1. 293T细胞是怎么包装病毒的
2. 慢病毒包装的简要流程
3. 慢病毒上清可以在4℃放多久

1、293T细胞是怎么包装病毒的

慢病毒包装简要程序（以六孔板中的1孔为例）：第一天：用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞，2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天：转染293FT细胞。

T细胞是由293 细胞派生， 表达SV40 大T抗原的人肾上皮细胞系， 被广泛应用于瞬时转染以过表达各种目标蛋白， 或是用以包装病毒。 293T 为贴壁细胞， 这种细胞对培养基的营养成分要求并不高。

将细胞培养瓶竖立放置，吸走培养基，如果培养基中的脱落细胞较多，说明细胞现在很容易脱落，只要加入1ml的PBS EDTA（0.02%），来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落，加入10mlMEM，混匀，不能吹打，分装2瓶。

腺病毒可以在293A细胞中进行转录，表达并可进行包装复制出大量高滴度病毒。293T是一种逆转录包装表达细胞，我做过也可进行表达，但还没有具体鉴定表达后的病毒是否可用。

t是淋巴细胞，293T细胞由293细胞通过基因技术派生出的细胞系，是经过腺病毒E1A基因的转染，能表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区。淋巴细胞是白细胞的一种，是体积最小的白细胞。

2、慢病毒包装的简要流程

慢病毒包装简要程序（以六孔板中的1孔为例）：第一天：用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞，2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天：转染293FT细胞。

慢病毒包装简要流程：1） 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。2） 慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3） 培养 48hrs – 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。

慢病毒包装简介及其用途 慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个，即gag、pol、rev。

慢病毒载体不表达任何HIV-1蛋白，免疫原性低，在注射部位无细胞免疫反应，体液免疫反应也较低，不影响病毒载体的第2次注射。

3、慢病毒上清可以在4℃放多久

周。慢病毒上清可以保存在4摄氏度下2周，在零下80摄氏度下保存12个月，慢病毒载体是以人类免疫缺陷I型病毒为基础发展起来的基因治疗载体。

用无血清的细胞基础培养基或1×PBS （无Ca2 /Mg2 ）稀释至合适滴度后进行细胞感染实验，稀释后的病毒4℃保存（请尽量在三天内用完），不建议进行分装冻存。

放置10小时。外泌体的细胞上清是一种宝贵的样本，为了保持其质量和完整性，存储和处理时需要注意适当的条件，外泌体的细胞上清可以在4℃下放置数小时到数天具体的时间可以根据实验需求和样本稳定性来确定。

细胞上清可以常温放1-2天。理论上可永久储存。研究表明，细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；细胞储存在液氮中，温度达-196℃，只要保存得当，理论上储存时间是无限的。

到此，以上就是小编对于慢病毒包装上清的问题就介绍到这了，希望介绍关于慢病毒包装上清的3点解答对大家有用。