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1. 慢病毒和腺病毒的区别?
2. 什么是慢病毒、腺病毒及腺相关病毒,他们在科研领域的主要应用和特点分别...
3. 慢病毒包装试剂盒包出病毒的滴度一般是多少
4. 293T细胞是怎么包装病毒的
5. 包装慢病毒的时候,包装质粒plp1 plp2 VSVG各起什么作用?

1、慢病毒和腺病毒的区别?

慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种（单链RNA病毒）。

真核表达载体包括腺病毒载体和慢病毒载体，在真核细胞内用于表达目的蛋白的载体都可以叫做真核载体。腺病毒载体携带外源基因较大，可瞬时高表达。慢病毒载体携带外源基因较小些，但可以重组入细胞基因组，稳定高表达。

因为鸽子的恢复得花一些时间，而肝细胞恢复比较慢又可能引起肝细胞感染病毒或者肝细胞损害. 腺病毒ii感染能够引起大量肝脏的坏疽。

腺病毒。这个小病毒只能引起呼吸道的轻微感染，却是十分有用的基因治疗载体。重组腺病毒被广泛用于各种疫苗的研制，包括极度危险的埃博拉。慢病毒（艾滋病病毒）。是的，你没看错。

2、什么是慢病毒、腺病毒及腺相关病毒,他们在科研领域的主要应用和特点分别...

慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种（单链RNA病毒）。

腺相关病毒（AAV）。这是一种新型的病毒载体，这种病毒具有宿主范围广，安全性高，免疫原性低，能稳定表达的优点。是基因治疗的“新星”。此外，还有很多病毒被广泛用于生产和科研。现在还有利用病毒治疗癌症的研究。

慢病毒操作较方便，周期也短。但腺病毒表达快，1-2天，慢病毒要2-4天。

慢病毒包装系统一般都是三质粒或四质粒包装系统。其中四质粒系统比三质粒系统在生物安全性上更好一些，所以应用较多。

3、慢病毒包装试剂盒包出病毒的滴度一般是多少

包装量：慢病毒可以包装4kb左右，不超过8kb的外源基因，腺病毒可以包装8kb左右外源基因 慢病毒操作较方便，周期也短。但腺病毒表达快，1-2天，慢病毒要2-4天。

每次冻融会降低病毒滴度10%~20%左右；为避免反复冻融建议按照每次的使用量进行分装。

我们在预实验方案中加入不同启动子的病毒进行感染，并且用定量PCR测定感染后细胞内整合病毒，这样即使病毒没有表达也可以观察感染。感染前一天接种，使得第二天细胞汇合度为30-40%。

慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3）培养48hrs-72hrs左右，收集含有病毒的上清培养液。4）病毒的纯化和浓缩。5）分装、-80℃保存。6）滴度测定目的基因鉴定。

重组腺病毒可通过超速离心纯化，并测定滴度及进行PCR鉴定。纯化后重组腺病毒的滴定浓度为1010pfu/ml，获得的量为2-4 ml。重组腺病毒的特性：一般的，单个腺病毒通常是在30×150mm细胞培养皿中制备的。

4、293T细胞是怎么包装病毒的

慢病毒包装简要程序（以六孔板中的1孔为例）：第一天：用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞，2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天：转染293FT细胞。

T细胞是由293 细胞派生， 表达SV40 大T抗原的人肾上皮细胞系， 被广泛应用于瞬时转染以过表达各种目标蛋白， 或是用以包装病毒。 293T 为贴壁细胞， 这种细胞对培养基的营养成分要求并不高。

将细胞培养瓶竖立放置，吸走培养基，如果培养基中的脱落细胞较多，说明细胞现在很容易脱落，只要加入1ml的PBS EDTA（0.02%），来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落，加入10mlMEM，混匀，不能吹打，分装2瓶。

腺病毒可以在293A细胞中进行转录，表达并可进行包装复制出大量高滴度病毒。293T是一种逆转录包装表达细胞，我做过也可进行表达，但还没有具体鉴定表达后的病毒是否可用。

t是淋巴细胞，293T细胞由293细胞通过基因技术派生出的细胞系，是经过腺病毒E1A基因的转染，能表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区。淋巴细胞是白细胞的一种，是体积最小的白细胞。

5、包装慢病毒的时候,包装质粒plp1 plp2 VSVG各起什么作用?

慢病毒载体（Lentiviral vector， LVs）是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效的将目的基因（蛋白质编码序列、shRNA或gRNA）导入动物和人的原代细胞或细胞系。

多质粒系统指的是慢病毒的包装系统，就三质粒（包装质粒、包膜蛋白质粒、转移质粒）包装系统来说，病毒包装必需的3个蛋白Gag/Pol、Rev、VSV-G分别放置在不同的质粒上，且互相之间没有任何同源序列，就是为了不使其进行重组。

慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装 RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。

对啊，用的是慢病毒的外壳，遗传物本质是无毒的质粒。只是借用慢病毒膜特异识别机制进入宿主细胞而已，以后就跟慢病毒没关系了。

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