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1. 什么是CRISPR/CAS9技术
2. cas9技术的原理与应用是什么?
3. cas9 null mutant是不是dcas9

1、什么是CRISPR/CAS9技术

因编辑工具CRISPR-Cas9可以纠正个体细胞内的缺陷，预测可以治愈或预防多种人类疾病。但Cas9系统改变的是DNA，而不是RNA.专业人士认为CRISPR平台事实上也可以用来修改RNA。

CRISPR-Cas9，是一种基因/DNA剪接技术。简单来说：CRISPR-Cas9蛋白是细菌漫长的生物演化过程中形成的一种适应性免疫防御物质。这种物质可以通过影响RNA链使得细胞DNA包含特定的目标序列的部分失去活性，从而改变细胞特性。

CRISPR-Cas9是继ZFN、TALENs等基因编辑技术推出后的第三代基因编辑技术，短短几年内，CRISPR-Cas9技术风靡全球， 成为现有基因编辑和基因修饰里面效率最高、最简便、成本最低、最容易上手的技术之一，成为当今最主流的基因编辑系统。

什么是CRISPR/Cas9？CRISPR---Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats 是在细菌和古细菌中广泛存在的成簇的、有规律的、间隔的短回文重复序列。

2、cas9技术的原理与应用是什么?

CRISPR-Cas9技术原理：CRISPR-Cas9技术包含两种重要的组分，一种是行使DNA双链切割功能的Cas9蛋白，而另一种则是具有导向功能的gRNA。

CRISPR-Cas9基因编辑技术就是通过人工设计的 sgRNA（guide RNA）来识别目的基因组序列，并引导 Cas9 蛋白酶进行有效切割 DNA 双链，形成双链断裂，损伤后修复会造成基因敲除或敲入等，最终达到对基因组DNA 进行修饰的目的。

CRISPR/Cas9是继锌指核酸内切酶（ZFN）”、“类转录激活因子效应物核酸酶（TALEN）”之后出现的第三代“基因组定点编辑技术”。

NHEJ是细胞内主要的DNA断裂损伤修复机制。利用靶向核酸酶可以在受精卵水平高效的实现移码突变，从而制备基因敲除模式动物。

3、cas9 null mutant是不是dcas9

dcas9是nuclease deactivated Cas9也就是核酸酶无活性的cas9但其他功能都正常。而你这个字面意思不太明确，突变后是酶切能力丧失了还是与gRNA结合能力丧失了或是其他突变都有可能，应该不是一个意思。

dCas9：失活Cas9 ，即 核酸内切酶失活的Cas9 （nuclease-dead mutants of Cas9， dCas9） ，能识别却不会切割。

CRISPRa（转录激活），作为基因过表达技术的新成员，是通过催化失活的Cas9（dCas9）连上转录激活子，来实现促进基因组特定位点的转录。目前CRISPRa已经发展出好几个新版本。

按照“20N NGG（PAM）”的设计原理设计sgRNA，至少设计3条。

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