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1. 慢病毒包装质粒,这么都没有毒性?
2. 慢病毒包装的简要流程
3. 什么是慢病毒包装
4. 包装反转录病毒(如慢病毒)时采用多质粒系统共转染细胞,那么包转好的...
5. 包装慢病毒的时候,包装质粒plp1 plp2 VSVG各起什么作用?

1、慢病毒包装质粒,这么都没有毒性?

慢病毒载体经过了一系列的改造，病毒在感染细胞中并不能自我复制，从而大大降低了其危险性。目前使用的四质粒包装系统，是重组系数最低的一个慢病毒包装系统，至今为止未见重组报道。但常用的三质粒包装系统陆续出现过重组报道。

由于瞬时转染中过量的质粒和转染试剂的残留，会引起终产物的污染。因此，稳定的慢病毒载体生产细胞株运行而生。慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

有趣的是，假病毒还会影响狂犬病毒糖蛋白包被的慢病毒的运输，导致轴突逆行运输 [12] 。注意：由于γ-逆转录病毒和慢病毒gag、pol和env基因间的亚型差异，转运质粒和包装质粒不能够互换。

慢病毒载体不表达任何HIV-1蛋白，免疫原性低，在注射部位无细胞免疫反应，体液免疫反应也较低，不影响病毒载体的第2次注射。

病毒包装的原理，就是有遗传物质有外壳蛋白，在细胞内可以指导二者包成病毒。

2、慢病毒包装的简要流程

慢病毒包装简要程序（以六孔板中的1孔为例）：第一天：用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞，2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天：转染293FT细胞。

慢病毒包装简要流程：1） 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。2） 慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3） 培养 48hrs – 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。

慢病毒包装简介及其用途 慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个，即gag、pol、rev。

3、什么是慢病毒包装

病毒包装的原理，就是有遗传物质有外壳蛋白，在细胞内可以指导二者包成病毒。

慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装 RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。

慢病毒包装简要流程：1）含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3）培养48hrs-72hrs左右，收集含有病毒的上清培养液。4）病毒的纯化和浓缩。

慢病毒（Lentivirus） 载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

4、包装反转录病毒(如慢病毒)时采用多质粒系统共转染细胞,那么包转好的...

病毒包装的原理，就是有遗传物质有外壳蛋白，在细胞内可以指导二者包成病毒。

慢病毒包装系统一般由慢病毒表达载体和慢病毒包装载体组成。而慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。

慢病毒包装简要流程：1）含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3）培养48hrs-72hrs左右，收集含有病毒的上清培养液。4）病毒的纯化和浓缩。

无需任何转染试剂，操作简便。5） 可以根据客户需要制备多种标记。慢病毒包装简要流程：1） 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。2） 慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。

细胞培养：B16F10和CD8 T细胞 慢病毒Cas9-Blast与pCMV-dR91和pCMV-VSV-G质粒共转染到HEK293T细胞中，然后收割病毒滴定后储存。

5、包装慢病毒的时候,包装质粒plp1 plp2 VSVG各起什么作用?

慢病毒载体（Lentiviral vector， LVs）是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效的将目的基因（蛋白质编码序列、shRNA或gRNA）导入动物和人的原代细胞或细胞系。

多质粒系统指的是慢病毒的包装系统，就三质粒（包装质粒、包膜蛋白质粒、转移质粒）包装系统来说，病毒包装必需的3个蛋白Gag/Pol、Rev、VSV-G分别放置在不同的质粒上，且互相之间没有任何同源序列，就是为了不使其进行重组。

慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装 RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。

对啊，用的是慢病毒的外壳，遗传物本质是无毒的质粒。只是借用慢病毒膜特异识别机制进入宿主细胞而已，以后就跟慢病毒没关系了。

目前使用的四质粒包装系统，是重组系数最低的一个慢病毒包装系统，至今为止未见重组报道。但常用的三质粒包装系统陆续出现过重组报道。所以建议您在超净台上操作时不要开启通风。

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