如何自己包装腺病毒(腺病毒包装步骤)
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1、腺病毒包装技术的简介
腺病毒具有嗜上皮细胞特性,因大多数肿瘤细胞均属于上皮细胞,这使得腺病毒非常适合应用于基因治疗领域。 病毒滴度高,可用于动物水平的实验。 有较好的生物安全性。
重组腺病毒的包装制备:重组腺病毒是从由侵染色斑组成单位(pfu)中分离获得的。一个单色斑是线性载体质粒转染后在20×15 cm板上由293A细胞连续侵染后被挑选和扩增形成的。
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。
病毒包装,是一种基因诊断、基因治疗技术。主要是将外源基因DNA或RNA片段导入靶细胞或组织,研究靶基因的上调或抑制情况。
2、慢病毒包装的原理
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。
慢病毒载体(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统,它能高效的将目的基因(蛋白质编码序列、shRNA或gRNA)导入动物和人的原代细胞或细胞系。
原理 慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。
慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。
3、腺病毒包装技术的技术要点
病毒滴度高,可用于动物水平的实验。 有较好的生物安全性。
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。
能自行复制,有效进行增殖,产生滴度高;与人类基因同源;能在同一细胞株或组织中设计表达多个基因。
病毒包装,是一种基因诊断、基因治疗技术。主要是将外源基因DNA或RNA片段导入靶细胞或组织,研究靶基因的上调或抑制情况。
腺病毒可用Shell vial技术进行快速鉴定。病毒标本经抗生素和离心处理,取上清接种于有细胞的Shell vial培养瓶,孵育1~2天,用特异性六邻体单克隆抗体对其抗原表位进行检测。也可用病人鼻粘膜上皮脱落细胞直接染色检测病毒抗原。
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