慢病毒包装换液时间长-慢病毒包装注意事项
大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于慢病毒包装换液时间长的问题,于是小编就整理了3个相关介绍慢病毒包装换液时间长的解答,让我们一起看看吧。
1、HIV慢病毒包装时如果第二天换液了会有什么影响
细胞状态 感染前确保细胞状态良好,若细胞感染前状态较差,感染后容易出现死亡。感染时间 病毒感染的时间建议不能过短,病毒感染的时间太短,病毒没有侵入到细胞内部。
再有如果单纯更换离合器片,压盘和分离轴承与片的磨损度不一致,需要重新磨合,这种情况非常容易造成新离合器片的老化度极具加速,大大缩短离合器片的使用寿命。
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有趣的是,假病毒还会影响狂犬病毒糖蛋白包被的慢病毒的运输,导致轴突逆行运输 [12] 。注意:由于γ-逆转录病毒和慢病毒gag、pol和env基因间的亚型差异,转运质粒和包装质粒不能够互换。
2、细胞慢病毒感染:注意要点
病毒感染细胞本来效率就较低,一定要注意以下几点:感染时的培养基尽量少些; 每1ml的培养基中加入5-10ul的Polybrene(储存液浓度为2mg/ml ),可以提高效率约3-5倍。
根据细胞增殖的速度调整细胞接种量,以保证在感染后4天左右细胞刚好快长满培养皿底部为宜。
最后,在培养过程中定期采用稀释法对细胞进行稀释,降低细胞密度,延缓细胞生长速率。
一) 细胞准备 将状态良好的目的细胞接种到24孔板,使细胞浓度为1×105/ml细胞,接种细胞数量因细胞的生长速度而略有不同,一般是保证第二天进行病毒感染的时候细胞汇合率介于50%至70%之间。
3、病毒转染脂肪干细胞后需要换液和传代吗
细胞处理后的第二天,在显微镜下观察细胞状态,如死细胞较多且细胞密度较低,需要进行换液操作。 (1)悬浮细胞请在高倍镜下观察,一般而言,活细胞轮廓圆润、界限清晰、透明度大、折光性强。
此时就需要对细胞进行换液。换液时吸掉旧培养液,用PBS 洗涤细胞一至二次,加入适量的新鲜培养基即可。细胞传代:随着培养时间的延长和细胞不断分裂,细胞之间相互接触而发生接触性抑制,生长速度减慢甚至停止。
当换液操作是实验需要时,可能在添加新的培养基前需要 PBS 清洗细胞以去除旧培养基的影响, 新添加的培养基也可根据实验需求进行特殊配制,不一定是完全培养基。
观察培养基是否正常,细胞状态如何,细胞密度如何,决定是否传代。观察时拧紧盖子。加热PBS、versene、培养基,(提前做好) 瓶子不要倒着放,不要让液体接触到瓶塞。
慢病毒转染属于稳转,可以将目的基因转入宿主染色体,是可以传代的。
到此,以上就是小编对于慢病毒包装换液时间长的问题就介绍到这了,希望介绍关于慢病毒包装换液时间长的3点解答对大家有用。
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