病毒包装细胞细胞消化,病毒里的细胞器
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1、已有质粒怎么慢病毒包装构建稳定细胞株
质粒转染是构建稳定细胞株的关键步骤,这也是该技术选择的优势之一。质粒转染可以通过多种途径实现,例如电穿孔法、钙磷转染法或利用交联剂等。对于小规模实验,利用商业化转染试剂进行转染也是一种方便、快捷的方法。
构建方法:先把质粒整合到染色体上后,用相应的质粒DNA中的抗性标志来筛选该细胞系,就行成了稳定表达的细胞株。细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群。
可以使用多种转染方法,如化学法、电穿孔法、病毒载体介导转染等。选择筛选:在转染后添加相应的选择压(例如抗生素),以筛选出已成功集成表达载体的细胞。通常会对细胞进行适当的稀释,以确保每个克隆细胞单元可以正常生长。
慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。
慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例):第一天:用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天:转染293FT细胞。
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