慢病毒载体包装四质粒(慢病毒包装质粒原理)
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- 包装慢病毒的时候,包装质粒plp1 plp2 VSVG各起什么作用?
- 第二代慢病毒和第三代慢病毒的区别
- 病毒包装的慢病毒
- 慢病毒包装和转染实验的安全性如何?是否一定要在生物安全柜中进行?_百 ...
1、包装慢病毒的时候,包装质粒plp1 plp2 VSVG各起什么作用?
慢病毒载体(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统,它能高效的将目的基因(蛋白质编码序列、shRNA或gRNA)导入动物和人的原代细胞或细胞系。
多质粒系统指的是慢病毒的包装系统,就三质粒(包装质粒、包膜蛋白质粒、转移质粒)包装系统来说,病毒包装必需的3个蛋白Gag/Pol、Rev、VSV-G分别放置在不同的质粒上,且互相之间没有任何同源序列,就是为了不使其进行重组。
慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装 RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。
对啊,用的是慢病毒的外壳,遗传物本质是无毒的质粒。只是借用慢病毒膜特异识别机制进入宿主细胞而已,以后就跟慢病毒没关系了。
目前使用的四质粒包装系统,是重组系数最低的一个慢病毒包装系统,至今为止未见重组报道。但常用的三质粒包装系统陆续出现过重组报道。所以建议您在超净台上操作时不要开启通风。
2、第二代慢病毒和第三代慢病毒的区别
接下来是三代包病毒系统,它比二代更加安全,效率却没有二代高。病毒感染的本质:它的本质是把自己的序列整入宿主的序列。
不同研究者们用不同的靶点和共刺激信号开展的研究所得到的第二代CAR和第三代CAR的比较结果存在一定的差异性。
慢病毒也被广泛地应用于表达RNAi的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差,转移到细胞内的siRNA半衰期短,体外合成siRNA对基因表达的抑制作用通常是短暂的,因而使其应用受到较大的限制。
慢病毒操作较方便,周期也短。但腺病毒表达快,1-2天,慢病毒要2-4天。
3、病毒包装的慢病毒
目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个,即gag、pol、rev。
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。
慢病毒载体( Lentiviral vector )较逆转录病毒载体有更广的宿主范围,慢病毒能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。
慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。
慢病毒载体不表达任何HIV-1蛋白,免疫原性低,在注射部位无细胞免疫反应,体液免疫反应也较低,不影响病毒载体的第2次注射。
4、慢病毒包装和转染实验的安全性如何?是否一定要在生物安全柜中进行?_百 ...
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。
综上特点决定了其应用、意义:用慢病毒载体携带目的基因比用质粒瞬时转染更适于稳转株构建。
安全设备和个体防护 1在实验室中所有感染性材料的操作都必须在Ⅲ级生物安全柜中进行。如果工作人员穿着整体的由生命维持系统供气的正压工作服,则相关操作可在Ⅱ级生物安全柜中进行。
生物安全等级通常可安全进行相关研究工作的条件的整合,与不同工作中的生物安全要求相匹配。控制生物安全风险的根本措施,就是根据生物安全评估结果,为所要开展的工作设定相应的生物安全等级。
那是因为可能内部环境温度太高或者是湿度太大,所以才会出现报警的响声。
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