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腺病毒载体包装方法(腺病毒载体采用的是哪型腺病毒)

腺病毒载体包装方法(腺病毒载体采用的是哪型腺病毒)

大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于腺病毒载体包装方法的问题,于是小编就整理了1个相关介绍腺病毒载体包装方法的解答,让我们一起看看吧。

  1. 病毒包装的腺病毒

1、病毒包装的腺病毒

腺病毒(adenovirus )腺病毒颗粒没有包膜的直径为70~90nm的颗粒,由252个壳粒呈二十面体排列构成。每个壳粒的直径为7~9nm。衣壳里是线状双链DNA分子,约含35 000 bp,两端各有长约100 bp的反向重复序列。

腺病毒呈无囊膜的球形结构,其病毒粒子在感染的细胞核内常呈晶格状排列,每个病毒颗粒包含一个36 kb的线性双链DNA,两端各有一个100~600 bp的反向末端重复序列(inverted terminal re-pea,t ITR), ITR的内侧为病毒包装信号,是病毒包装所需要的顺式作用元件。

腺病毒(Adenovirus)是目前最高效可靠的重组病毒表达系统之一,可用于在哺乳细胞中瞬时及高水平地表达shRNA或目的蛋白。其具备以下优点: 宿主范围广。腺病毒可感染一系列哺乳动物细胞,除可感染几乎所有人的细胞类型外,还可感染包括大鼠、小鼠、兔、猪、羊、猴、鸡等物种。

重组腺病毒的包装制备:重组腺病毒是从由侵染色斑组成单位(pfu)中分离获得的。一个单色斑是线性载体质粒转染后在20×15 cm板上由293A细胞连续侵染后被挑选和扩增形成的。重组腺病毒可通过超速离心纯化,并测定滴度及进行PCR鉴定。纯化后重组腺病毒的滴定浓度为1010pfu/ml,获得的量为2-4 ml。

itr),是复制的起始位点。在左端itr的3′侧有一段长约300bp的包装信号(ψ)介导腺病毒基因组包装入病毒衣壳。对腺病毒而言,只有包括两端的itr和包装信号(ψ)的约0.5kb的序列是顺式作用元件,也就是说必须由腺病毒载体自身携带,而其他的30余种蛋白都可以通过辅助病毒(或细胞)反式补足。

到此,以上就是小编对于腺病毒载体包装方法的问题就介绍到这了,希望介绍关于腺病毒载体包装方法的1点解答对大家有用。

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