新型病毒包装设计方案,新冠病毒外包装
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1、【分子克隆_载体构建_病毒包装】如何设计AAV载体?
③拷斯(Cos)质粒:是一类带有噬菌体DNA粘性末端顺序的质粒DNA分子。是噬菌体-质粒混合物。此类载体分子容量大,可携带45kb的外源DNA片段。也能象一般质粒一样携带小片段DNA,直接转化寄主菌。这类载体常被用来构建高等生物基因文库。
1、重组DNA分子的构建 构建重组DNA分子是基因克隆实验的第一步,亦即,把环状的载体在指定部位切断,然后把含目的基因的DNA分子插入其中,再将两者连接起来。这一过程需要两种DNA操作酶:限制性内切酶(restriction endonucleases)和连接酶(ligases)。
克隆载体通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体,在载体上插入合适大小的 外源DNA片段,并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中,并在宿主细胞中大量繁殖。常见 的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。
目前多数慢病毒载体的另一个元件是肝炎病毒土拨鼠转录后调控元件(WPRE) ,该元件如果置于转基因序列的正义方向下游,能使表达效率提高5~8 倍( Zufferey et al. 1999) 。AAV 载体 大多数AAV 载体的转基因表达盒的两侧是AAV2ITR,在这些载体上没有源于野生型病毒的其他基因组元件。
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