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病毒包装与滴度测定-病毒包装与滴度测定的区别

病毒包装与滴度测定-病毒包装与滴度测定的区别

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  1. 腺病毒包装技术的技术要点
  2. 病毒滴度的计算
  3. 病毒包装实验有毒没毒
  4. 慢病毒包装的简要流程

1、腺病毒包装技术的技术要点

病毒滴度高,可用于动物水平的实验。 有较好的生物安全性。

病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。

能自行复制,有效进行增殖,产生滴度高;与人类基因同源;能在同一细胞株或组织中设计表达多个基因。

病毒包装,是一种基因诊断、基因治疗技术。主要是将外源基因DNA或RNA片段导入靶细胞或组织,研究靶基因的上调或抑制情况。

2、病毒滴度的计算

公式:每分钟滴数=液体的总量(ml)乘以滴系数(滴 /毫升)除以输液所用的时间(分钟)。

氨水滴度换算1滴度=1/20当量浓度=1/20×17克氨/升=0.85克氨/升 也即病毒的毒力,或毒价,衡量病毒滴度的单位有最小致死量(MLD)、最小感染量(MID)和半数致死量(LD50),其中以LD50最常用。

病毒滴度测定中的pfu与TCID50之间的联系是:1个TCID50约等于0.7个PFU,即:1TCID50≈0.7PFU。例如:某病毒的滴度为105TCID50/ml,那么它换算成PFU为:105TCID50/ml 7*104PFU/ml。

②所谓滴度既病毒悬液的浓度,就是指pfu的数值。③滴度是稀释度的倒数。例如上例中的 1 :180 的稀释度,其滴度就是 180 。效价是滴度的同义词。效价即滴度,两者通用。

PFU:plaque forming unit,空斑形成单位。感染性滴度的单位一般表示为PFU/ml。由于测定pfu往往重复性较差,因此近些年许多研究又开始采用TCID50方法来计算病毒的感染单位。因此建议也可使用TCID50法。

3、病毒包装实验有毒没毒

无毒。是医药用品棉签所有用完的包装袋。核酸检测法是通过查找患者的呼吸道标本,来判断是否被病毒感染的方法,是新型冠状病毒感染确诊的金标准。

答案是肯定的。专家解释称,那些来自于疫区的包装快递表面很大可能会带有新冠病毒,不过经过长时间运输病毒早已经没有了活性,很难再传染到人体上。不管病毒是死是活,最终结果都会呈现出阳性,所以大家没必要看到阳性结果就恐慌。

对啊,用的是慢病毒的外壳,遗传物本质是无毒的质粒。只是借用慢病毒膜特异识别机制进入宿主细胞而已,以后就跟慢病毒没关系了。

病毒包装,是一种基因诊断、基因治疗技术。主要是将外源基因DNA或RNA片段导入靶细胞或组织,研究靶基因的上调或抑制情况。

后续的NT-PCR实验只要能检测出病毒的核酸既可以做出诊断。而且能够在常温下保存相对较长的时间。非灭活型:非灭活型的保存液通常为红色,当保存液变质时,其PH会发生改变,易于识别保存液是否变质。

4、慢病毒包装的简要流程

慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例):第一天:用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天:转染293FT细胞。

慢病毒包装简要流程:1) 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。2) 慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3) 培养 48hrs – 72hrs 左右,收集含有病毒的上清培养液。

慢病毒包装简介及其用途 慢病毒( Lentivirus )载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷 I 型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个,即gag、pol、rev。

慢病毒载体不表达任何HIV-1蛋白,免疫原性低,在注射部位无细胞免疫反应,体液免疫反应也较低,不影响病毒载体的第2次注射。

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