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1. 293T细胞是怎么包装病毒的

1、293T细胞是怎么包装病毒的

慢病毒包装简要程序（以六孔板中的1孔为例）：第一天：用无抗生素DMEM 10%FBS铺板293FT细胞，2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天：转染293FT细胞。

慢病毒包装简要流程：1）含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3）培养48hrs-72hrs左右，收集含有病毒的上清培养液。4）病毒的纯化和浓缩。5）分装、-80℃保存。6）滴度测定目的基因鉴定。

T细胞是由293 细胞派生， 表达SV40 大T抗原的人肾上皮细胞系， 被广泛应用于瞬时转染以过表达各种目标蛋白， 或是用以包装病毒。 293T 为贴壁细胞， 这种细胞对培养基的营养成分要求并不高。培养条件为：完全培养基： 高糖 DMEM， 10% 胎牛血清； 冻存液： 胎牛血清或完全培养基， 10% DMSO。

病毒包装的原理，就是有遗传物质有外壳蛋白，在细胞内可以指导二者包成病毒。腺病毒扩增，也只能在293A里扩增，其他的细胞不行.慢病毒载体多是由HIV改造的，野生型的慢病毒载体是可以复制的，但是用于实验室就只能通过改造使其变为复制缺陷型的。

包装成分通常被分开构建到两个质粒上，一个质粒表达Gag和Pol蛋白，另一个质粒表达Env蛋白，其目的也是降低恢复成野生型病毒的可能。将包装成分与载体成分的3个质粒共转染细胞（如人肾293T细胞），即可在细胞上清中收获只有一次性感染能力而无复制能力的、携带目的基因的HIV-1载体颗粒。

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