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1. 细胞转染的常用步骤

1、细胞转染的常用步骤

转染步骤如下：试验准备：200ul/1mlTip头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。弃掉培养皿中的培养基，用1ml的PBS溶液洗涤两次。用Tip头加入1mlTrypsin液，消化1分钟（37。C，5%CO2）。

化学法转染 常用试剂：例如聚合物如聚乙烯亚胺PEI、聚-L-赖氨酸PLL、聚-L-半胱氨酸PLC；阳离子表面活性剂。操作步骤：将转染试剂与目标分子（如质粒DNA、siRNA等）混合，形成载体-目标分子复合物。将该复合物加入包含目标细胞的培养基中，使其与细胞发生相互作用，从而导入目标分子。

mimic 转染步骤（ 24 孔板） 提前 1 天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。

．加入转染液，摇动培养瓶，使其与细胞充分接触，放入孵箱温育20－40分钟，观察细胞至皱缩变圆为止。6．吸去转染液，TBS-D洗两遍， PBS洗一遍（动作必须轻柔，避免已转染DNA的细胞脱落），加入10ml全培养基 3％CO2浓度37℃培养。

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