慢病毒包装时间超过72h,慢病毒包装多久可以换液
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1、转染293t多长时间能产生慢病毒
一般认为,在转染后的第24~48 h之间,是慢病毒的生产高峰,这时病毒产 生速率高于降解速率。我们可以在这个时间点收获第一批慢病毒,此时也 是滴度最高的时候。在随后的 48~72 h中,包装依然持续进行,但滴度下降(生产能力下降,但降解速率不变)。
含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化,提取慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。5)分装、-80℃保存。6)滴度测定目的基因检定,并出具检测报告。
HEK-293T细胞是293T(293tsA1609neo)细胞系(ATCC CRL-11268)的衍生物。细胞持续表达SV40抗原,该细胞常用于转染实验,转染效率较高。
接下来是病毒生产,通过将载体与HIV-1基因组相关的包装成分和辅助质粒共转染293T细胞,病毒颗粒在细胞内被包装并分泌至细胞外。随后,通过超离心纯化,获得高浓度的病毒液。感染过程则依赖于慢病毒的特性,它可以有效地感染神经元、肝细胞、心肌细胞等不同类型的细胞,为基因治疗和研究提供了理想的工具。
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