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1. 【分子克隆_载体构建_病毒包装】如何设计AAV载体?

1、【分子克隆_载体构建_病毒包装】如何设计AAV载体?

１、重组DNA分子的构建 构建重组DNA分子是基因克隆实验的第一步，亦即，把环状的载体在指定部位切断，然后把含目的基因的DNA分子插入其中，再将两者连接起来。这一过程需要两种DNA操作酶：限制性内切酶（restriction endonucleases）和连接酶（ligases）。

第一代载体所携带的转基因的两侧是2 个完整的LTR， 由增强子（U3） 、R 区（即转录起始区，在病毒颗粒中的载体基因组两端均存在）及U5 区构成。病毒载体的包装主要由包装信号序列（ψ）介导，而邻近的 gag 序列能够显著提高其包装效率。

克隆载体通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。常见 的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。

病毒载体，这个分子生物学的瑰宝，就像生物界的隐形信使，凭借其独特的结构和功能，成功地将目的基因“投递”到细胞的深处，甚至是活体组织中。

载体是指能传递能量或运载其他物质的物体。条件：能在受主细胞内稳定存在，不会对宿主细胞造成危害，能自我复制。具有标记基因。含有1至多个限制酶的识别序列及切点。含有启动子，终止子。

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