慢病毒包装要换液-慢病毒包装换液时间过久
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1、细胞慢病毒感染:注意要点
第二天:根据MOI稀释病毒,用PBS或无血清培养液,确保细胞在CO2培养箱中过夜。 第三天:更换新鲜培养液,根据细胞状态调整更换时间。 第六天:通过荧光显微镜或Q-PCR检测感染效率,慢病毒表达可能需要96小时后观察。
慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3) 培养 48hrs – 72hrs 左右,收集含有病毒的上清培养液。4) 病毒的纯化和浓缩。5) 分装、- 80 ℃保存。6) 滴度测定目的基因检定,并出具检测报告。
慢病毒载体的研究发展得很快,研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的的基因治疗效果,因此具有广阔的应用前景。
病毒感染细胞本来效率就较低,一定要注意以下几点:感染时的培养基尽量少些; 每1ml的培养基中加入5-10ul的Polybrene(储存液浓度为2mg/ml ),可以提高效率约3-5倍。不过病毒感染效率的问题都是相对的,达到自己的研究目的即可。
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